IGF-1与bFGF联合应用诱导骨髓间充质干细胞向肌腱细胞分化的实验研究

发布时间：2019-05-10 00:36

【摘要】：目的：联合应用碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）与胰岛素样生长因子IGF-1作为诱导剂探讨向肌腱细胞方向转化的诱导技术，以探索一种新的肌腱组织工程种子细胞的获取方法。 方法： 1.分离、培养大鼠BMSCs并进行分子生物学鉴定：密度梯度离心法体外分离BMSCs，并对培养的BMSCs进行干细胞表型鉴定与成骨、成脂肪及成软骨多向诱导确定所获取的BMSCs是具有多向分化能力的BMSCs。 2.观察bFGF和IGF-1联合应用对BMSCs向肌腱细胞分化的作用：将BMSCs随机分为4组，即实验组A(IGF-1+bFGF)、实验组B(IGF-1)、实验组C(bFGF)及空白对照组D于37℃、5%CO2孵箱中培养。用相差显微镜观察细胞形态的变化；RT-PCR方法检测各组细胞内I型胶原、III型胶原以及scleraxis mRNA在3天、7天、14天和21天时的表达水平；免疫荧光染色检测各组细胞内I型胶原、III型胶原14天的表达水平。 结果： 1.分离培养的BMSCs在形态学上表现为长梭形、呈漩涡状生长。流式细胞仪检测结果显示细胞表面CD29和CD90表达阳性，分别为99.24%、99.06%；CD45表达阴性，为98.71%。BMSCs经诱导后茜素红、油红O、甲苯胺蓝及II型胶原免疫细胞化学染色均为阳性。 2.诱导后的BMSCs A组、B组、C组、与空白对照组相比其I、III、SCX在基因及蛋白水平上具有显著差异，从3天开始不断递增，14天后转而下降，以7天至14天的变化最明显与空白对照组差异最大。而在A、B、C三组中，以B组I、III、SCX基因的表达最明显，免疫荧光染色检测中B组细胞内I型胶原、Ⅲ型胶原的表达水平最高。 结论： 大鼠BMSCs体外诱导各组所获得的细胞与阴性对照组细胞在形态与功能上存在显著差别，，其形态特征及胞内基质表达近似肌腱细胞；尤其是IGF-1组。bFGF与IGF-1两种细胞因子联用没有明显明显协同效应。
[Abstract]:Objective: to explore the induction technique of transformation to tendon cells by using basic fibroblast growth factor (basic fibroblast growth factor,bFGF and insulin-like growth factor IGF-1 as inducers. In order to explore a new method for obtaining seed cells from tendon tissue engineering. Method: 1. Rat BMSCs was isolated, cultured and identified by molecular biology: BMSCs, was isolated in vitro by density gradient centrifugation and stem cell phenotype and osteogenesis of cultured BMSCs were identified. Multidirectional induction of adipogenesis and chondrogenesis determines that the obtained BMSCs is a BMSCs. with multidirectional differentiation ability. 2. To observe the effect of bFGF and IGF-1 on the differentiation of BMSCs into tendon cells: BMSCs was randomly divided into four groups: experimental group A (IGF-1 bFGF), experimental group B (IGF-1), experimental group C (bFGF) and blank control group D at 37 鈩

本文编号：2473217