嵌合有HCV多中和抗原表位的乙肝S抗原病毒样颗粒的制备与鉴定

发布时间：2019-05-14 05:35

【摘要】：制备嵌合HCV多中和表位及HCV包膜蛋白E2的HBV S抗原病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),并进行鉴定、纯化和浓缩。HEK293T细胞用DMEM培养至90%密度时,将构建的重组真核表达载体pCI-MEpS、pCI-E2S用脂质体法转染HEK293T细胞,48h后在培养上清中得到自我装配的嵌合HCV多中和表位及包膜蛋白E2的HBV病毒样颗粒(VLP-MEpS,VLP-M2S)。蔗糖密度梯度离心,透析浓缩后,电化学发光法进行HBsAg定量测定、电镜分析和Western blotting鉴定。制备出的嵌合病毒样颗粒VLP-MEpS和VLP-E2S经浓缩后其HBsAg定量最高达到3×10~4 ng/mL。实验表明我们成功制备出嵌合有HCV多中和抗原表位的HBV VLP,为进一步分析诱导的中和抗体研究奠定基础。
[Abstract]:HBV S antigen virus like particles (virus-like particle,VLP) of chimeric HCV neutralizing epitopes and HCV envelope protein E2 were prepared and identified, purified and concentrated. HEK293T cells were cultured to 90% density by DMEM. The constructed recombinant eukaryotic expression vector pCI-MEpS,pCI-E2S was transfected into HEK293T cells by lipid method. 48 hours later, the self-assembled chimeric HCV polyneutralizing epitopes and envelope protein E2 HBV virus-like particles (VLP-MEpS,VLP-M2S) were obtained in the culture medium. After sucrose density gradient centrifugation, dialysis and concentration, HBsAg quantitative determination, electron microscopic analysis and Western blotting identification were carried out by electrochemiluminescence method. The maximum HBsAg quantity of chimeric virus-like particles VLP-MEpS and VLP-E2S was up to 3 脳 10 脳 4 ng/mL. after concentration. The results showed that we successfully prepared HBV VLP, with multiple neutralizing epitopes of HCV, which laid a foundation for further analysis of induced neutralizing antibodies.
【作者单位】： 第四军医大学唐都医院临床实验与检验科 第四军医大学实验动物中心 第四军医大学基础部微生物学教研室
【基金】：国家自然科学基金(81072500;31370924)
【分类号】：R373.21

【参考文献】

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本文编号：2476471