急慢性应激对小鼠空间学习记忆功能的影响及脑内Wnt3a的表达

发布时间：2017-03-16 05:01

  本文关键词：急慢性应激对小鼠空间学习记忆功能的影响及脑内Wnt3a的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的与方法:本研究急性应激模型的建立是通过对小白鼠进行足底电击作为唯一应激源;慢性应激模型的建立是通过7种不同的应激源(包括冰水游泳、通宵照明、斜笼拥挤、禁食、高台、禁水、电击,每天随机从中选择1种应激方式,总共持续21天)。研究急性应激作用和慢性应激作用对小白鼠自发行为和空间学习记忆能力的影响,以及脑内Wnt3a和β-catenin表达的变化。实验小白鼠的行为学观察和检测,以及空间学习记忆能力的检测分别通过旷场实验和Morris水迷宫实验方法;通过HE染色技术和免疫组织化学染色技术检测小白鼠脑内各区的神经元形态结构及Wnt3a和β-cantenin的表达。研究结果:1.旷场实验结果:急性应激组小白鼠与对照组小白鼠相比,在急性应激后立即,应激组小白鼠直立次数和爬行格数均明显提高,粪便粒数和中心格停留时间有明显的减少,而修饰次数无明显变化;在急性应激停止后一周,两组比较各项指标无显著差异。慢性应激组小白鼠与对照组小白鼠相比,应激组小白鼠的直立次数和爬行格数均显著减少,而中心格停留时间显著提高;而在慢性应激停止后一周,两组小白鼠的穿越格数、直立次数、修饰次数、粪便粒数都有显著性差异,但中心格停留时间差异不显著。2.Morris水迷宫实验结果:急性应激组小白鼠与对照组小白鼠相比,在定位航行实验中,急性应激实验小白鼠搜寻平台的逃避潜伏期明显缩短;在空间搜索实验中,急性应激实验小白鼠在目标象限(即有平台的象限)游泳时间明显提高。急性应激停止一周后的数据差异不显著。慢性应激组小白鼠与对照组小白鼠相比,在定位航行试验中,慢性应激实验小白鼠寻找平台的逃避潜伏期明显提高。慢性应激停止后一周,除了在第二周期有明显差异,其他三个周期差异不明显。空间搜索实验中,应激组小白鼠在目标象限的游泳时间明显减少;慢性应激停止后一周差异不明显。3.HE染色实验结果:急性应激组小白鼠与对照组小白鼠相比,神经元形态结构无明显变化;一周后差异不明显。而慢性应激组小白鼠与对照组小白鼠相比,海马和前脑皮层的神经元数目变化较明显,细胞着色颜色浅,并且染色不均匀,细胞发生萎缩变形,出现了不同程度的损伤情况;应激停止后一周有所恢复。4.免疫组化实验结果:急性应激组小白鼠和对照组小白鼠,在应激后立即和应激后一周,海马各区均未见明显的Wnt3a和β-catenin阳性细胞表达,且差异不明显,平均目标灰度值差异也不明显;而在前脑皮层中,均可见Wnt3a和β-catenin阳性细胞明显表达。应激组小白鼠与对照组比较,在急性应激后立即,前脑皮层Wnt3a和β-catenin阳性细胞数增多且差异显著,应激后一周差异不显著。慢性应激中,在应激后立即和应激后一周,应激组和对照组小白鼠海马各区均未见Wnt3a和β-catenin阳性细胞明显表达;而在前脑皮层中,均可见Wnt3a和β-catenin阳性细胞表达,与对照组小白鼠比较,应激组小白鼠Wnt3a阳性细胞数表达明显较少,β-catenin也明显减少。研究结论:1.急性应激作用使小白鼠的旷场行为增强,空间学习记忆能力增强;而慢性应激作用使小白鼠的旷场行为下降,明显损伤实验小白鼠的空间学习记忆能力。2.急性应激作用对小白鼠的神经元形态结构无明显影响;慢性应激作用则会导致小白鼠海马和前脑皮层神经元形态发生变化。3.急性应激和慢性应激作用中,在小白鼠海马均未见Wnt3a和β-catenin明显表达;而急性应激作用导致小白鼠前脑皮层Wnt3a和β-catenin表达显著上调,慢性应激作用导致小白鼠前脑皮层Wnt3a和β-catenin表达下调显著。4.应激后小白鼠行为和学习记忆能力的变化可能与前脑皮层Wnt3a的表达有关。
【关键词】：急性应激 慢性应激 旷场行为 空间学习记忆 Wnt3a β-catenin 海马 前脑皮层
【学位授予单位】：曲阜师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R338.64
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 英文缩略词7-11
• 第一部分 文献综述 急慢性应激作用对动物学习记忆功能的影响及其机制的研究进展11-18
• 1.急性应激作用和慢性应激作用对动物机体的影响11-13
• 1.1 应激源和应激反应11-12
• 1.2 涉及应激反应的脑区12-13
• 1.2.1 前脑皮层12
• 1.2.2 海马12-13
• 2.学习记忆功能的研究进展13-17
• 2.1 学习记忆的神经生物学机制13
• 2.2 涉及学习记忆的脑区13-15
• 2.2.1 前脑皮层13-14
• 2.2.2 海马14
• 2.2.3 纹状体边缘区14
• 2.2.4 嗅皮层14-15
• 2.3 Wnt在学习记忆中的作用15-17
• 2.3.1 Wnt的生物学特性15
• 2.3.2 Wnt在神经发生中的作用15
• 2.3.3 Wnt其他作用15-16
• 2.3.4 Wnt3a与学习记忆的关系16
• 2.3.5 β-catenin与经典信号通路16-17
• 3.本实验研究的目的意义17-18
• 第二部分 实验研究18-42
• 一.急性应激作用对小鼠空间学习记忆的影响及脑内Wnt3a表达18-32
• 1.前言18
• 2.实验材料和实验方法18-24
• 2.1 实验材料18-19
• 2.1.1 实验动物18-19
• 2.1.2 实验药品试剂19
• 2.1.3 实验仪器19
• 2.2 实验方法19-20
• 2.2.1 动物分组19
• 2.2.2 急性应激动物模型建立19-20
• 2.3 小白鼠行为学检测20-21
• 2.3.1 旷场(Open field)行为20
• 2.3.2 Morris水迷宫实验测定学习记忆能力20-21
• 2.4 不同脑区神经元形态学观察以及其Wnt3a和 β-catenin的表达21-24
• 2.4.1 取脑21-22
• 2.4.2 HE染色22
• 2.4.3 免疫组织化学(Immunohistochemistry)染色22-24
• 2.4.4 图像分析24
• 2.5 统计学处理24
• 3.实验结果24-30
• 3.1 急性应激作用对小白鼠旷场行为的结果24-25
• 3.2 急性应激作用对小白鼠空间学习记忆能力的影响25-28
• 3.2.1 急性应激作用对小白鼠定位航行学习能力的影响25-26
• 3.2.2 急性应激作用对小鼠空间搜索能力的影响26-28
• 3.3. 急性应激作用对小白鼠各脑区神经元形态的影响28
• 3.4. 急性应激作用对小白鼠各脑区Wnt3a表达的影响28-29
• 3.5 急性应激作用对小白鼠各脑区 β-catenin表达的影响29-30
• 4.讨论30-32
• 二、慢性应激作用对小白鼠空间学习记忆的影响及脑内Wnt3a的表达32-42
• 1 前言32
• 2.实验材料和实验方法32-33
• 2.1 实验材料32
• 2.1.1 实验动物32
• 2.1.2 实验试剂32
• 2.1.3 实验仪器32
• 2.2 实验方法32-33
• 2.2.1 动物分组32
• 2.2.2 建立慢性应激动物模型32-33
• 2.3 小白鼠行为学检测33
• 2.3.1 旷场(Open field)行为33
• 2.3.2 Morris水迷宫学习记忆能力检验33
• 2.4 不同脑区神经元形态学的观察及Wnt3a及 β-catenin的表达33
• 2.4.1 取脑33
• 2.4.2 HE染色33
• 2.4.3 免疫组织化学33
• 2.4.4 图像分析33
• 2.5 统计学处理33
• 3.结果33-40
• 3.1 慢性应激作用对小鼠体重的影响33-34
• 3.2 慢性应激作用对小白鼠旷场行为的影响34
• 3.3 慢性应激作用对小白鼠空间学习记忆能力的影响34-38
• 3.3.1 慢性应激作用对小白鼠定位航行学习能力的影响34-36
• 3.3.2 慢性应激作用对小白鼠空间搜索能力的影响36-38
• 3.4 慢性应激作用对小白鼠各脑区神经元形态的影响38
• 3.5 慢性应激作用对小白鼠各脑区Wnt3a表达的影响38-39
• 3.6 慢性应激作用对小白鼠各脑区 β-catenin表达的影响39-40
• 4.讨论40-42
• 结论42-43
• 附图43-49
• 参考文献49-56
• 在校期间的研究成果及发表的学术论文56-57
• 致谢57

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本文编号：251333