JNK信号通路对小胶质细胞功能及其表面TNFR的影响

发布时间：2019-07-18 08:15

【摘要】：目的：在前期实验中，我们通过对不同时间低氧培养的小胶质细胞(BV2细胞)的功能状态研究，发现BV2细胞在低氧培养1小时和12小时下分别起到神经保护和神经损伤的作用。本实验将进一步探讨BV2细胞JNK信号通路对小胶质细胞功能及肿瘤坏死因子受体(TNFR)表达的影响。 方法：以小鼠小胶质细胞瘤(BV2细胞株)及大鼠嗜铬细胞瘤(PC12细胞株)为研究对象，，分别用来代表小胶质细胞和神经元。将BV2细胞实验分组为：正常对照组(常氧组)、低氧1h组、低氧1h+SP600125组、低氧12h组、低氧12h+SP600125组。应用western blot检测低氧下BV2细胞JNK信号通路阻断剂SP600125最佳阻断浓度。然后在不同程度低氧及有无SP600125干预下培养BV2细胞，用其培养液来培养PC12细胞，通过CCK-8法测定PC12细胞存活率并以此来反映BV2细胞功能，同时应用western blot检测BV2细胞TNF-α受体TNFR1与TNFR2表达情况，应用ELISA法检测在不同功能状态下BV2细胞分泌表达TNF-α、IL-1β、NGF情况。 结果： 1.正常对照组和损伤对照组PC12细胞的存活率分别为：100%和52.37%；BV2细胞低氧培养1h时，PC12细胞的存活率为75.96%，加入SP600125后PC12细胞存活率增加到81.88%，差异有显著性(P0.01)；BV2细胞低氧培养12h时，PC12细胞的存活率为36.87%，加入SP600125后PC12细胞存活率可达57.61%，差异有显著性(P0.01)。 2.在正常情况下，BV2细胞表面无TNFR1表达，仅有少量TNFR2表达。在低氧培养1h时，TNFR2表达增多，加入SP600125能进一步增加TNFR2的表达(P0.05)；在低氧培养12h时，TNFR1的表达增多，加入SP600125能进一步减少TNFR1的表达(P0.05)。 3. BV2细胞在常氧培养下，其分泌的TNF-α、 IL-1β、 NGF分别为447.77±7.62pg/ml、4.38±0.29pg/ml和122.19±4.94pg/ml；BV2细胞经低氧培养1h，其分泌的TNF-α、IL-1β、NGF均有所增加，分别为612.19±15.06pg/ml、15.22±0.73pg/ml和214.22±5.19pg/ml；当低氧培养12h，TNF-α和IL-1β水平增加到1265.24±14.36pg/ml、22.87±1.03pg/ml，而NGF的水平则下降到25.47±1.74pg/ml。加入SP600125后能明显减少TNF-α和IL-1β的分泌而增加NGF的分泌(P0.01)。 结论： 1.缺氧条件下，JNK信号通路介导了BV2细胞的损伤作用。 2. JNK信号通路参与调控NGF、TNF-α、IL-1β的分泌。 3. JNK信号通路可影响TNFR1与TNFR2的表达。
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图片说明： 用 SPSS19.0 统计软件进行统计学分析，计量资料数据均。率的比较用卡方检验，两组间比较用 t 检验，多组比验标准均取 P<0.05 差异具有统计学意义。结 果 与 PC12 细胞密度与吸光度值标准曲线的绘制与方程的 BV2 细胞不同密度所对应的平均吸光度值(表 1)，应用胞密度与吸光度值标准曲线(图 1)，得方程：y=25.00x-2.8，此方程用于计算下面实验中 BV2 细胞密度。密度 BV2 细胞的吸光度值80 40 20 10 5 2.5 1.25 3.358 1.648 0.854 0.462 0.289 0.223 0.199
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图片说明： 根据 PC12 细胞不同密度所对应的平均吸光度值(表 2)，建立 PC1度值标准曲线(图 2)，并得方程：y=88.62x-12.48 (x:吸光度值，方程用于计算下面实验中 PC12 细胞密度。表 2 不同密度 PC12 细胞的吸光度度(104/ml) 300 150 75 37.5 18.75 9.375 光度值 3.486 1.883 1.042 0.573 0.324 0.232
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

【参考文献】

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本文编号：2515751