维甲酸和叶酸通过Notch信号通路影响神经干细胞的分化研究

发布时间：2019-09-14 07:46

【摘要】：目的 研究维甲酸和叶酸对神经干细胞增殖、凋亡的影响,研究维甲酸和叶酸通过影响Notch信号通路对神经干细胞分化的影响,为研究中枢神经系统发育、神经元轴突重塑、神经再生及神经系统疾病的治疗打下基础。 方法 用不同浓度维甲酸刺激神经干细胞,在干预过程中加入叶酸,运用细胞免疫荧光和增殖实验来观察维甲酸和叶酸对神经干细胞增殖的影响;运用DNA ladder、流式细胞术和TUNEL实验技术来观察维甲酸和叶酸对神经干细胞凋亡的影响;运用细胞免疫荧光、激光共聚焦、RT-PCR、实时荧光定量PCR技术来研究维甲酸和叶酸对神经干细胞Notch信号通路的影响,并通过这条通路诱导神经干细胞畸形分化。 结果 1、适量维甲酸对神经干细胞的增殖没有明显作用,和叶酸共用能够促进NSC增殖,且比单纯使用叶酸增殖效果明显。 2、过量全反式维甲酸能够引起NSC凋亡,但是较高浓度叶酸能够拮抗维甲酸的这种作用,使凋亡率下降。 3、1μM维甲酸能够抑制Notch信号通路相关分子表达,引起NSC定向分化为神经元和星型胶质细胞,但是不能分化为少突胶质细胞 4、维甲酸通过Notch通路引发的促分化作用可以被叶酸抑制或者减轻。
【图文】：

传代后神经干细胞很快再次增殖并聚集形成大小不等的神经球，表现出良好的活性和增殖能力（图1-1B、C、D）。A：孕 15 天小鼠胚胎（18×）,B-D：培养中的 NSC（×40、×100、×200）图 1-1 神经干细胞的提取和培养Figure 1-1 The extraction and culture of NSC3.2 神经干细胞具备自我更新能力免疫荧光激光共聚焦图片显示新增殖的细胞因为培养基中事先加入 Brdu，它可以代替正常 DNA 中的碱基 T，，结合在新生细胞的细胞核的 DNA 中。在使用 HCl打开 DNA 结构后可与 Brdu 抗体特异性结合，在免疫荧光实验中表示新生的神经干细胞，Brdu 阳性（绿色）的细胞都表达 Nestin 阳性（红色），随机在荧光显微镜下选择 6 个 200 倍视野分别计数红色和绿色的数目，Brdu 阳性细胞占所有 Nestin阳性细胞数量的 62%以上（图 1-3），说明新生的细胞全部为神经干细胞，该细胞具有很强的自我更新能力，符合神经干细胞的特征（图 1-2）。5

图 1-2 神经干细胞的 Nestin 和 Brdu 双染激光共聚焦图Figure1-2 The confocal lase of NSC of Nestin and Brdu double staining图 1-3 平均每个视野 Nestin 阳性与 Brdu 阳性细胞数量对比图（n=6）
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

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本文编号：2535771