应用两种生物模式探讨抗VEGF单克隆抗体BD0801的抗血管生成作用

发布时间：2017-03-19 03:09

  本文关键词：应用两种生物模式探讨抗VEGF单克隆抗体BD0801的抗血管生成作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：应用两种生物模式探讨人源化抗VEGF单克隆抗体BD0801单药或联合细胞毒药物的抗血管生成作用,并初步探讨其机制。方法：1、BD0801单药实验：斑马鱼实验：采用24hpf(hours post fertilization, hpf,受精后小时)健康血管荧光转基因斑马鱼胚胎实验动物模型,脱去外膜后随机分组：BD0801低浓度组,BD0801中浓度组,BD0801高浓度组；贝伐珠单抗(Bev)低浓度组,Bev中浓度组,Bev高浓度组；鱼水对照组(阴性对照组)。加入药物与胚胎共同孵育48小时后在荧光显微镜下观察背部节间血管(intersegmental vessels, ISV)生成数目,采用实时定量RT-PCR检测各组胚胎VEGF mRNA的相对表达量。鸡胚尿囊膜(CAM)实验：采用九日龄鸡胚作为实验对象,随机分为七组：BD0801低浓度组,BD0801中浓度组,BD0801高浓度组；贝伐珠单抗(Bev)低浓度组,Bev中浓度组,Bev高浓度组；生理盐水对照组(阴性对照组)。暴露CAM后植入甲基纤维素碟,加入各组药物,72小时后观察血管生长情况,计算紧邻甲基纤维素碟旁一个视野内的血管数目,并进行比较。2、BD0801联合细胞毒药物实验：斑马鱼实验：在单药实验取得阳性结果的基础上,采用24hpf健康血管荧光转基因斑马鱼胚胎作为实验动物模型,脱去外膜后随机分组：BD0801单药处理组和BD0801联合OXA处理组、BD0801联合5-FU处理组；Bev单药处理组(阳性对照组)和Bev联合OXA处理组(阳性对照组)、Bev联合5-FU处理组(阳性对照组)、OXA和5-FU单药处理组(阳性对照组)、鱼水对照组(阴性对照组)。加入药物与胚胎共同孵育48小时后在荧光显微镜下观察背部节间血管(intersegmental vessels, ISV)生成数目,采用实时定量RT-PCR检测各组胚胎VEGF mRNA的相对表达量。鸡胚尿囊膜(CAM)实验：采用九日龄鸡胚作为实验对象,随机分为七组BD0801单药处理组和BD0801联合OXA处理组、BD0801联合5-FU处理组；Bev单药处理组(阳性对照组)和Bev联合OXA处理组(阳性对照组)、Bev联合5-FU处理组(阳性对照组)、OXA和5-FU单药处理组(阳性对照组)。暴露CAM后植入甲基纤维素碟,加入各组药物,72小时后观察血管生长情况,计算紧邻甲基纤维素碟旁一个视野内的血管数目,并进行比较。结果：BD0801单药实验：1、与阴性对照组相比,BD0801能够有效抑制斑马鱼胚胎ISV生成(P0.05),与阳性药物Bev相比,BD0801抑制作用更强,抑制作用与药物浓度呈正相关。RT-PCR检测结果显示：BD0801可以下调斑马鱼胚胎组织VEGF mRNA的水平(P0.05),与阳性对照组相比,下调作用更强,且与药物浓度呈正相关。2、与阴性对照组相比,BD0801具有抑制CAM血管生长的作用(P0.05),与阳性药物Bev相比,抑制作用更强,抑制作用与药物浓度呈正相关。BD0801联合细胞毒药物实验：1、与阴性对照组相比,BD0801单药、Bev单药、OXA单药、5-FU单药及各联合用药组能够有效抑制斑马鱼胚胎ISV生成(P0.05),与单药组相比,联合用药组抑制作用更强(P0.05)。且与Bev联合用药相比,BD0801联合用药对血管抑制程度更强(P0.05)。RT-PCR检测结果显示：BD0801单药、Bev单药、OXA单药、5-FU单药及各联合用药组VEGF基因mRNA的表达被下调,联合用药组的下调程度强于单药组,且与Bev联合用药组相比,BD0801联合用药组VEGF基因mRNA的表达量更低。2、与阴性对照组相比,BD0801单药、Bev单药、OXA单药、5-FU单药及各联合用药组具有抑制CAM血管生长的作用(P0.05),与单药组相比,联合用药组抑制作用更强(P0.05)。与Bev联合用药相比,BD0801联合用药抑制血管的作用更强(P0.05)。结论：BD0801能够有效抑制斑马鱼及CAM模型的血管生成,且作用强于Bev,其作用机制可能与下调组织细胞VEGF mRNA的水平有关；BD0801联合5-FU/OXA可协同抑制斑马鱼及CAM模型血管生成,其作用机制可能与协同下调组织细胞VEGF mRNA的水平有关。本研究提示,BD0801单药或联合5-FU/OXA可能通过靶向VEGF而有效抑制斑马鱼及CAM模型血管生成,值得进一步深入研究其临床应用价值。
【关键词】：BD0801 VEGF 斑马鱼 鸡胚尿囊膜
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 缩略词表12-13
• 前言13-15
• 第一章 文献综述 索拉非尼联合化疗治疗晚期肝细胞癌的临床研究进展15-21
• 第二章 实验材料21-24
• 2.1 动物21
• 2.2 主要试剂21-22
• 2.3 主要仪器22
• 2.4 主要试剂r>制22-24
• 第三章 BD0801单药抗血管生成作用的研究24-32
• 3.1 实验方法24-27
• 3.2 实验结果27-32
• 第四章 BD0801联合细胞毒药物抗血管生成作用的研究32-41
• 4.1 实验方法32-36
• 4.2 实验结果36-41
• 第五章 讨论41-44
• 第六章 结论44-45
• 参考文献45-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士学位期间发表论文50-51
• 个人简介51

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本文编号：255443