内质网应激对PC12稳转细胞株突变Htt586蓄积的影响

发布时间：2019-11-22 07:02

【摘要】：目的:研究稳定表达亨廷顿蛋白(Huntingtin,Htt)氨基末端片段Htt-586片段的PC12细胞在衣霉素诱导的内质网应激的条件下,对Htt586片段的剪切与蓄积的影响。 方法:采用慢病毒表达系统建立高分化PC12细胞稳定表达野生型与突变型Htt-586片段的亨廷顿舞蹈病的细胞模型,并用衣霉素处理制作内质网应激模型。运用MTT法检测衣霉素对细胞存活的影响,Western blot检测CHOP、HSP70、Caspase-12蛋白的表达作为ER应激的指标,检测LC3,p62水平指示ER应激条件下细胞自噬活性的改变,并检测ER应激条件下突变Huntingtin蛋白在细胞内的剪切与蓄积情况。 结果:利用慢病毒表达系统,建立了稳定表达野生型与突变型Htt-586片段的PC12高分化细胞株;内质网应激诱导剂衣霉素(TM)在浓度为250 ng/ml下作用36 h能够显著激活稳转细胞的内质网应激效应,内质网应激指示蛋白CHOP、caspsase-12显著上升。同时,抗凋亡蛋白Bcl-2水平显著下降。细胞的自噬指标蛋白LC3-II水平明显增加,p62升高。Htt586片段尤其是突变Htt586蓄积明显增多。 结论:成功建立衣霉素介导的稳定表达野生型与突变型Htt-586片段的PC12细胞株的内质网应激反应模型。研究表明,衣霉素显著诱导稳转细胞株的内质网应激,并进而引起Htt蛋白的蓄积。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R363

【参考文献】

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本文编号：2564368