T细胞活化中NF-κB通过特异性结合Cbl-b启动子序列负向调控Cbl-b表达

发布时间：2019-11-27 20:59

【摘要】：NF-κ B和Cbl-b均是T细胞活化信号网络中重要分子，其调控关系尚不完全清除。研究发现Cbl-b可影响T细胞内NF-κ B水平。鉴于信号分子间调控作用的相互性，我们设想NF-κ B是否对Cbl-b也有调控作用？因此，我们分离一种T细胞特异性NF-κ B活化障碍小鼠的T细胞， western blot发现其Cbl-b显著升高。利用AliBaba2.1软件分析，发现Cbl-b启动子中含有可与NF-κ B结合的核苷酸序列。这初步证实我们的设想。本项目将进一步利用EMSA来验证NF-κ B与预测的Cbl-b启动子中特定核苷酸序列结合及其特异性。通过转染质粒构建NF-κ B P65超量表达，并通过双报告基因技术观察其对CBL-B启动子序列介导的蛋白翻译和转录的影响。还将应用小分子化合物下调T细胞内NF-κ B，同时监测Cbl-b mRNA的相应变化和T细胞活化情况。同时通过用小分子化合物体内应用于CBL-B敲除小鼠的心脏移植模型，，观察此NF-κ B抑制剂在野生型小鼠上引导的心脏移植物存活延长的效应能否同样出现。以期从结构和功能上证实NF-κ B对Cbl-b的调控，并为移植排斥反应的防治提供新的治疗靶点。
【图文】：

1.2 TCR 结合反应后，CBL-B 在 WT B6 小鼠 T 细胞中表现出浓度下降，而在Iκ Bα Δ N-Tg 小鼠 T 细胞中无类似反应。CD3/CD28 mAbs 体外能显著够刺激活化 B6 小鼠 T 细胞中 NF-κ Bp65（图 2）。而在相同刺激处理的 Iκ Bα Δ N-Tg 小鼠 T 细胞中 NF-κ Bp65 没有显著活化（图 2.）。已经发表的实验数据中，B6 小鼠 T 细胞中的 CBL-B 在被 CD3/CD28mAbs 刺激孵育 24h 后显著降低（图 2.）。但当 Iκ Bα Δ N-TgT 细胞被 CD3/CD28mAbs 刺激孵育 24h 后，CBL-B 无降低（图 2.）鉴于 Iκ Bα Δ N-Tg 小鼠和 WTB6 小鼠的主要区别在于 T 细胞缺乏 NF-κ B 活化，我们推断 T 细胞中 NF-κ B活化能够影响 CBL-B 的蛋白水平。因此，我们引入了一种 NF-κ B 抑制剂熊果酸用于进一步检验此假设。

CD3/CD28 mAbs 的刺激能够显著活化细胞中 NF-κ Bp65，而熊果素能够剂量依耐性抑制 NF-κ Bp65 的活化。T细胞胞浆中的 CBL-B在 CD3/CD28 抗体刺激 24h后显著降低，但经熊果素处理后，降低程度被削减。更重要的是，对 CBL-B的 降 低 的 抑 制 程 度 和 熊 果 素 浓 度 表 现 出 正 相 关 （ 图 3. ）。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

【共引文献】

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本文编号：2566763