胰岛素原乳腺特异表达转基因细胞和转基因小鼠模型的制备

发布时间：2017-03-20 14:05

  本文关键词：胰岛素原乳腺特异表达转基因细胞和转基因小鼠模型的制备，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：利用非胰岛p细胞生产胰岛素一直生物合成胰岛素研究领域的热点,胰岛素原在胰岛p细胞中主要通过PCl/3, PC2和CPH三种酶加工成有活性的胰岛素。研究发现,PC1/3酶在哺乳动物乳腺细胞中广泛表达。本研究合成了两条经过修饰得人胰岛素原基因,Seq-662、Seq-792,以及未经过修饰的胰岛素原基因,Seq-663。构建乳腺特异表达载体662-PBC-1、663-PBC-1、792-PBC-1。利用人乳腺癌细胞系,BCAP-37制备转基因细胞,分离单细胞来源细胞65株,其中携带外源基因的细胞23株。选取其中的662-B4、663-4和792-F三株进行诱导、刺激人胰岛素原基因的表达显示,在相同诱导时间内,不同转基因细胞中人胰岛素原基因的表达,随着葡萄糖刺激浓度的不断增加,但是不同细胞对于葡萄糖的反应存在不同。综上所述,本研究构建了2个修饰的人胰岛素原乳腺表达载体,并且检测发现,他们能够在细胞和个体水平很好的诱导表达人胰岛素原基因。这将为今后在大动物乳腺中生产人胰岛素提供理论基础。
【关键词】：人胰岛素原 转基因小鼠模型
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.1;R-332
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 缩略词表8-9
• 引言9-12
• 1 材料12-13
• 1.1 主要仪器设备12
• 1.2 主要材料、试剂及耗材12
• 1.3 细胞培养液、诱导液以及刺激液的配制12-13
• 2 方法13-17
• 2.1 人类乳腺癌细胞BCAP-37的培养13
• 2.2 人胰岛素原乳腺特异性表达载体的构建13
• 2.3 BCAP-37细胞转染、单克隆培养13-14
• 2.4 人胰岛素原转基因BCAP-37细胞的鉴定14-15
• 2.5 BCAP-37细胞的诱导刺激及鉴定实验15
• 2.6 原核显微注射技术制备人类胰岛素原转基因小鼠15
• 2.7 转基因小鼠的鉴定及不同组织中人胰岛素原基因的表达分析15-16
• 2.8 转人胰岛素原基因HST胎儿成纤维细胞制备16
• 2.9 统计方法16-17
• 3 实验结果17-24
• 3.1 人乳腺特异性表达载体662-PBC1、663-PBC1以及792-PBC1的构建及鉴定17
• 3.2 人类乳腺癌细胞系BCAP-37的转染及挑取单克隆实验17-21
• 3.3 人类乳腺癌细胞BCAP-37阳性单克隆测序鉴定21
• 3.4 转基因小鼠鉴定21-24
• 4 讨论24-26
• 参考文献26-29
• 文献综述29-40
• 参考文献36-40
• 致谢40-41
• 攻读硕士期间发表的论文41

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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  本文关键词：胰岛素原乳腺特异表达转基因细胞和转基因小鼠模型的制备，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：257890