基于NMDAR1信号通路探讨天香胶囊对晕动病模型大鼠前庭核兴奋性的影响

发布时间：2020-03-21 06:35

【摘要】：晕动病是指人们在乘坐汽车、轮船、飞机等交通工具时,受不适宜的运动刺激而引发的急性症候群,主要表现为眩晕、恶心、呕吐、面色苍白、乏力等。大量研究表明,前庭系统在晕动病的发生中起重要作用,由外周前庭传入而激活前庭核的兴奋性,是晕动病病理过程中的关键环节。以往研究发现,晕动病发生时,前庭核神经元中主要的兴奋性神经递质是谷氨酸,且NMDAR1介导的信号转导通路被激活,其下游信号分子CaMKⅡα与CREB经活化后可进一步诱导c-fos基因的表达。近年来大量研究已证实c-fos蛋白可作为前庭核神经元激活或兴奋的标志,其表达水平能够反映前庭核神经元的活动状态。目前,抗晕动药物以西药制剂为主,虽有一定的疗效,但存在明显的副作用,而中医药在防治晕动病方面具有独特的优势。本课题组在中医理论指导下所研发的中药复方天香胶囊是在长期治疗晕动病的临床实践基础上,创新晕动病的中医病机认识而形成的一个临床经验方,经过初步的临床应用证实该药物在晕动病的防治中具有较好的作用,但药理机制尚不完全明确。因此,本实验采用双轴旋转刺激法建立晕动病模型,观察天香胶囊对晕动病模型大鼠行为学、前庭核c-fos表达以及NMDAR1信号通路的影响,旨在验证其药效作用、明确其抗晕动作用靶点,为深入研究其药理机制以及未来开发临床新药奠定基础。目的:观察中药复方天香胶囊对晕动病模型大鼠行为学的影响,以验证天香胶囊的药效作用;观察天香胶囊对晕动病模型大鼠前庭核c-fos及NMDAR1介导的信号转导通路的影响,以阐明天香胶囊在晕动病中发挥调节前庭核兴奋性的分子靶点,深入诠释天香胶囊抗晕动病的内在机制,同时为NMDAR1介导的信号通路在晕动病前庭核兴奋发生中的作用提供进一步的实验佐证。方法:1.天香胶囊对晕动病模型大鼠行为学的影响:将SD大鼠随机分成6组,即正常组、模型组、阳性药组(东莨菪碱)、天香胶囊低剂量组、天香胶囊中剂量组、天香胶囊高剂量组。灌胃预给药3天后,采用双轴旋转刺激法复制晕动病模型,通过晕反应指数评分、自发活动实验、异嗜高岭土实验检测各组大鼠行为学变化,以验证天香胶囊的药效作用。2.天香胶囊对晕动病模型大鼠前庭核c-fos蛋白表达的影响:实验分组和处理同上,通过ELISA、Western blotting与免疫组化法检测c-fos蛋白在各组SD大鼠前庭核中的表达情况,以观察天香胶囊对c-fos蛋白表达的影响,从而揭示天香胶囊对晕动病模型大鼠前庭核兴奋性的调节作用。3.天香胶囊对晕动病模型大鼠前庭核NMDAR1介导的信号通路的影响:实验分组和处理同上,用Western blotting技术检测各组前庭核NMDAR1蛋白表达以及CaMKⅡα亚基与CREB蛋白磷酸化水平,以观察天香胶囊对晕动病模型大鼠前庭核NMDAR1及其下游因子的影响,从而揭示天香胶囊调节晕动病模型大鼠前庭核兴奋性的分子机制。结果:1.天香胶囊可改善晕动病模型大鼠的行为学变化:与正常组比较,模型组大鼠晕反应指数、排便颗粒数和高岭土摄入量均显著增高(P0.01),自发活动总路程与次数均显著减少(P0.01),表明该旋转刺激诱发了大鼠晕动病的常见症状;与模型组比较,天香胶囊中、高剂量组晕反应指数与高岭土摄入量显著减少(P0.01,P0.05),自发活动增加(P0.01,P0.05),提示天香胶囊具有一定的抗晕动作用。2.天香胶囊可下调晕动病模型大鼠前庭核兴奋性:与正常组比较,模型组大鼠c-fos蛋白表达水平显著增高,差异具有统计学意义(P0.01),表明前庭核兴奋性增强,再次证实前庭核兴奋性增加参与了大鼠晕动病发生的病理过程。而与模型组比较,天香胶囊各剂量组c-fos蛋白表达水平均显著降低,差异具有统计学意义(P0.01,P0-05),提示天香胶囊可能通过调节前庭核兴奋性来发挥其抗晕动的作用。3.天香胶囊对晕动病模型大鼠前庭核NMDAR1信号通路有下调作用:与正常组比较,模型组大鼠前庭核NMDAR1表达水平以及下游信号分子CaMKⅡα与CREB磷酸化水平显著增高,具有统计学差异(P0.01),提示旋转刺激诱导了 NMDAR1信号通路以及其下游信号分子的活化,提示NMDAR1信号通路活化可能介导了晕动病发生时前庭核兴奋性增强;与模型组比较,天香胶囊中、高剂量组可以显著抑制NMDAR1表达水平以及下调其下游分子CaMKⅡα与CREB磷酸化水平,具有统计学差异(P0.01,P0.05),提示天香胶囊可能通过下调NMDAR1信号通路来调节前庭核的兴奋性,从而发挥其抗晕动的作用。结论:1.天香胶囊可有效改善晕动病模型大鼠的行为学变化,显示了良好的抗晕动作用。2.天香胶囊可降低晕动病模型大鼠前庭核组织c-fos蛋白表达,提示其抗晕动作用机制可能与下调大鼠前庭核兴奋性有关。3.天香胶囊可调节晕动病模型大鼠前庭核组织NMDAR1、P-CaMKⅡα、P-CREB蛋白的表达,抑制NMDAR1介导的信号转导通路,这可能是其在治疗晕动病中降低前庭核兴奋性的内在分子机制之一。
【图文】：

基于ＮＭＤＡＲ１信号通路探讨天香胶囊对晕动病模型大鼠前庭核兴奋性的影响表２：各组大鼠自发活动总路程与自发活动次数情况（［±Ｓ）逡逑组别逦ｎ逦自发活动总路程（ｃｍ）自发活动次常组逦８逦１６１０．９３±３１３．２３逦１４４．３８±３５．型组逦８逦６１４．２５士邋１３０．７８＊＊逦５０．００±１８．７０性药组逦８逦９１０．５３±９０．８５＃逦８０．８８±２０．８囊低剂量组逦８逦６８２．３３±２０９．５２逦５３．００士邋２０．４囊中剂量组逦８逦９６７．５０±１６５．７０＃＃逦７８．６７±１９．囊高剂量组逦８逦８８６．１６±２８０．５０＃逦９０．１３±２８．９９常组比较，＊＊Ｐ＜０．０１；与模型组比较，＃Ｐ＜0．0５，邋＞＜0．0１逡逑？逦２５００－

高剂量组与阳性药组大鼠嗜食高岭土行为明显减轻，３ｄ高岭土摄降低（Ｐ＜０．０５，邋Ｐ＜０．０１），提示天香胶囊具有一定的抗晕动作用；天性药组比较，差异无统计学意义。逡逑表３：天香胶囊对晕动病模型大鼠高岭土摄入量的影响（ｉ±ｓ）逡逑组别逦ｎ邋造模ＲＵ后３ｄ尚岭土摄入总量的差正常组逦８逦０．０８±０．１１逡逑模型组逦８逦１．７１±０．６５＊＊逡逑性药组逦８逦１．２４±０．４１＃逡逑囊低剂量组逦８逦１．５３±０．５２逡逑囊中剂量组逦８逦０．９４±０．３５＾逡逑囊高剂量组逦８逦１．２１±０．４５＃逡逑组比较，＊＊Ｐ＜０．０１；与模型组比较，，＃Ｐ＜０．０５，斤＜０．０１逡逑
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 尚宇;顾佩菲;杨闻宇;周凯泉;赵t

本文编号：2592933