白色念珠菌lqg1和Cdc3功能分析

发布时间：2020-03-23 19:06

【摘要】：白色念珠菌是一种最普遍的致病性真菌。本文研究了三种与白色念珠菌生长相关蛋白,分别是支架蛋白Iqg1,Septin蛋白Cdc3,以及腺苷酸环化酶Cyr1。详细研究了 Iqg1在白色念珠菌形态发生中的作用,Cdc3的磷酸化对白色念珠菌菌丝生长的影响。并对Cyr1的不同功能区段进行了蛋白表达、纯化和结晶实验。白色念珠菌Iqg1是一种支架蛋白,在很多生物学过程中发挥重要作用。本文主要研究了 Iqg1与Sec3、Hof1之间的相互作用关系。通过离体蛋白结合试验,我们发现Iqg1的Gap-C功能区段与Sec3的N端有直接的相互作用,在Iqg1敲除菌株中,Sec3-GFP的极性分布完全消失,表明Iqg1直接影响Sec3在细胞内的分布,即Iqg1与Sec3之间功能上也相互影响,这些结果进一步验证了离体蛋白结合试验的结果。同样地,在离体蛋白结合试验中,我们也检测到Iqg1与Hof1之间的相互作用。通过对Hof1-GFP的Time-lapse microscopy观察,我们发现在野生型菌株中Hof1-GFP的极性分布在30分钟后完全消失,而在Iqg1敲除菌株中Hof1-GFP的极性分布在120分钟后依然不消失,表明Iqg1直接影响Hof1的极性分布与蛋白质稳定性。该结果也进一步验证了上述离体蛋白结合试验的结果。Septin环的架构转变是白色念珠菌细胞分裂的关键。Cdc3是Septin环中的重要一员,所以在白色念珠菌细胞分裂等生物学过程中发挥重要作用。本实验室的前期研究发现Cdc3有被磷酸化的现象。为了探讨Cdc3磷酸化的生理意义,我们构建了 Cdc3的磷酸化氨基酸位点的突变体。结果表明,把Cdc3的磷酸化氨基酸位点突变成模拟磷酸化的氨基酸后,跟野生型菌株相比,突变体菌株在菌丝生长条件下形成的菌丝比较短而粗,表明Cdc3的磷酸化可能在白色念珠菌的菌丝生长过程中发挥重要作用。环腺苷酸-蛋白激酶A信号通路(cAMP-PKApathway)是白色念珠菌调节菌丝生长的重要信号通路,腺苷酸环化酶在该信号通路中起着信号受体的关键性作用。为了更好地研究其功能,本实验对Cyr1四个主要功能区段进行了离体表达和纯化,并发现Cyr1的NRA和PP2C功能区与菌丝生长相关蛋白的Pho81的ANK功能区发生直接相互作用。
【学位授予单位】：安徽大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R379.4

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本文编号：2597136