hAMSCs培养上清液对痤疮大鼠炎症模型TNF-α和MMP-2基因表达的影响

发布时间：2020-03-24 19:40

【摘要】：第一部分构建痤疮大鼠炎症模型目的:以痤疮丙酸杆菌(P.acnes)混悬液外耳廓皮下注射构建痤疮大鼠炎症模型。方法:将21只6~8周龄、体重250±30g健康雌性SD大鼠,采用随机数字法分为空白组(BC组)、痤疮模型组(AC组)和生理盐水组(NS组),每组7只。BC组不予任何处理,另两组大鼠均于实验第1天分别予P.acnes混悬液和生理盐水50ul在双侧外耳廓中央皮下注射1次,24小时后从大体观察三组大鼠注射前后耳廓皮肤变化,并用无菌针头挑取AC组耳廓肿胀部位组织,接种于血平板,厌氧罐中培养48h,证明为P.acnes感染。三组大鼠均于第7天处死,取局部皮肤行组织病理学观察,并采用荧光定量PCR(RT-PCR)测定三组大鼠右侧耳廓组织中TNF-α、MMP-2表达水平。结果:大体观:BC组大鼠无变化;AC组大鼠双侧耳廓于注射24小时后局部出现红肿,1周后红肿未消退,并出现红色丘疹;NS组大鼠双侧耳廓注射24小时后局部出现肿胀,1周后肿胀完全消退。微生物检测:AC组镜下可见P.acnes生长,证实为P.acnes感染。组织病理:BC组可见表皮、真皮及皮下组织,结构清楚,未见明显炎症细胞浸润;AC组见皮下组织结构消失,炎症细胞弥漫性浸润,部分形成脓肿,部分毛囊口扩张,皮脂腺消失;NS组皮肤各层结构清楚,未见明显炎症细胞浸润。基因检测:三组大鼠耳廓组织内均可检测到TNF-α、MMP-2基因;NS组与BC组比较,TNF-α、MMP-2基因水平指标差异无统计学意义(P0.05);AC组较NS组TNF-α基因水平增高,指标差异有明显统计学意义(P0.01),AC组较NS组MMP-2基因水平增高,指标差异有统计学意义(P0.05)。结论:以P.acne混悬液外耳廓皮下注射可成功构建痤疮大鼠炎症模型。第二部分h AMSCs培养上清液对痤疮大鼠炎症模型TNF-α和MMP-2基因表达的影响目的:明确人h AMSCs培养上清液中是否存在抗炎因子IL-10;观察h AMSCs培养上清液对痤疮大鼠炎症模型TNF-α和MMP-2基因表达的影响并初步探讨其可能的抗炎机制。方法:采用双抗体夹心ABC-ELISA法对h AMSCs培养上清液中的抗炎因子IL-10进行浓度测定。将49只6~8周龄、体重250±30g健康雌性SD大鼠按随机数字法分为空白组(BC组)、生理盐水组(NS组)、痤疮模型组(AC组)、痤疮模型未治疗组(P组)、h AMSCs培养上清液注射治疗组(H1组)、h AMSCs培养上清液涂搽治疗组(H2组)、异维A酸红霉素凝胶涂搽治疗组(YW组),共7组,每组7只。BC组无处理,AC组和NS组处理同第一部分。P组:于第1天在SD大鼠双侧外耳廓中央皮下注射予P.ance混悬液50μl,1周后成功构建痤疮大鼠炎症模型,之后不予任何处理,再观察4周后处死;H1组:在建模1周后双侧外耳廓中央皮下注射h AMSCs培养上清液25μl治疗,2次/周;H2组于构建模型1周后双侧外耳廓涂搽h AMSCs培养上清液治疗,1次/日;YW组于构建模型1周后双侧外耳廓涂搽异维A酸红霉素凝胶治疗,1次/日;H1组、H2组、YW组治均在治疗4周后处死。RT-PCR测定各组耳廓组织中TNF-α和MMP-2基因表达水平。结果:1.h AMSCs培养上清液中IL-10的浓度为281.22±10.35pg/ml。2.大体上观察大鼠耳廓局部皮肤变化:BC组、NS组、AC组变化同第一部分。P组:建模1周后双侧大鼠耳廓肿胀,少量红色丘疹,观察4周后双侧耳廓丘疹明显增多增大,丘疹表面紧张发亮;H1组治疗4周后耳廓皮损基本消退;H2组治疗4周后耳廓皮损基本消退;YW组治疗4周后耳廓皮损完全消退。3.H1组较AC组TNF-α、MMP-2基因水平均低,各指标差异有明显统计学意义(P0.01);H2组较AC组TNF-α、MMP-2基因表达水平均低,各指标差异有明显统计学意义(P0.01);P组较AC组TNF-α、MMP-2基因水平均高,各指标差异无统计学意义(P0.05);H1组较H2组TNF-α、MMP-2基因水平表达均低,各指标差异无统计学意义(P0.05);YW组较H1组、H2组TNF-α、MMP-2基因水平表达均低,各指标差异无统计学意义(P0.05)。结论:1.通过h AMSCs上清液干预可减轻痤疮大鼠耳廓炎症反应,其机制可能是通过其含有的IL-10、TIMPs分别抑制TNF-α、MMP-2的表达,从而改善痤疮炎性皮损。2.h AMSCs上清液局部注射与涂搽对于痤疮大鼠炎症疗效无明显差异。
【图文】：

图 5a 图 5b2.3 耳廓组织病理观察2.3.1 耳廓组织病理学改变BC 组：表皮、真皮及皮下组织，结构清楚，未见明显炎症细胞AC 组：表皮角化过度，部分毛囊口扩张，毛囊皮脂腺周围及真漫性浸润，皮脂腺消失。NS 组：皮肤各层结构清楚，未见明显炎症细胞浸润。（图 6）

图 5a 图 5b2.3 耳廓组织病理观察2.3.1 耳廓组织病理学改变BC 组：表皮、真皮及皮下组织，结构清楚，未见明显炎症细胞浸润。AC 组：表皮角化过度，部分毛囊口扩张，毛囊皮脂腺周围及真皮内炎症细胞弥漫性浸润，，皮脂腺消失。NS 组：皮肤各层结构清楚，未见明显炎症细胞浸润。（图 6）
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R758.733;R-332

【参考文献】

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本文编号：2598765