组蛋白脱乙酰化酶6抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型的入核运输

发布时间：2017-03-21 23:00

  本文关键词：组蛋白脱乙酰化酶6抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型的入核运输，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：单纯疱疹病毒I型(HSV-1)是一种常见的致病双链DNA病毒,易感于上皮细胞,引起口唇疱疹等疾病。同时HSV-1病毒可从原发病灶传送到神经组织,并在三叉神经节形成潜伏感染,也容易诱发神经系统疾病。实验室前期研究发现,HSV-1感染过程中会激发乙酰化的微管蛋白(Acetylatedα-tubulin)的表达,使微管处于稳定状态,利于病毒在细胞中的运输过程。调控α-tubulin乙酰化程度的一个重要的宿主蛋白是组蛋白脱乙酰化酶6(HDAC6)。HDAC6是组蛋白脱乙酰化酶(HDACs)家族中唯一主要分布在细胞质中,并具有去乙酰化和泛素化活性的激酶,参与调控多种细胞质蛋白的翻译后修饰过程。本课题集中研究HDAC6在HSV-1感染过程中起的作用,并初步探讨相关机制。本课题通过抑制剂处理,si RNA干扰及转染质粒过表达HDAC6等一系列实验手段,探讨HDAC6对病毒HSV-1的入核运输过程中的影响。实验结果显示,HSV-1感染早期(2、4、6 h),HDAC6的表达受到抑制;同时HDAC6的底物,α-tubulin和HSP90的乙酰化程度也随着HSV-1感染而提高。使用抑制剂处理或si RNA干扰HDAC6后,其表达量和活性受到抑制;而无论空斑实验,还是从基因水平和蛋白水平检测,都证明HSV-1的感染能力增强。脂质体转染质粒到细胞从而过表达HDAC6后,则明显抑制了HSV-1的感染。综上,宿主蛋白HDAC6可以抑制HSV-1在细胞内的运输过程。此外,本研究还初步探讨了HSV-1感染过程中引起HDAC6下调和活性抑制的原因及机制。围绕HDAC6相关蛋白,研究病毒可能影响的通路,同时研究病毒蛋白VP22在其中所起的作用。实验发现,HSV-1感染过程中Rho家族中的Rho A、ROCK1、ROCK2表达下调,蛋白TPPP1和转录因子p300表达上调,三种因素都能导致HDAC6活性受到抑制。通过si RNA干扰VP22或过表达VP22发现,HSV-1病毒蛋白VP22通过影响TPPP1和p300参与病毒入核运输的调控过程。病毒的生存依附于宿主细胞,整个生活周期与宿主细胞息息相关。探讨病毒与宿主之间的相互关系,利于了解病毒并对其加以控制,同时也可为寻找新的抗病毒治疗靶点提供参考依据。
【关键词】：组蛋白脱乙酰化酶6 单纯疱疹病毒I型 病毒胞内运输 微管乙酰化 p300
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R373
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-5
• 英文缩写对照表5-9
• 第一部分 前言9-19
• 1. 单纯疱疹病毒（Herpes Simplex Virus I；HSV）9-10
• 1.1 简介9
• 1.2 HSV-1 相关疾病9-10
• 1.3 临床治疗10
• 2. HSV-1 与细胞骨架10-14
• 2.1 HSV-1 生活周期10-11
• 2.2 HSV-1 胞内运输11-12
• 2.3 微管（MTs）12-14
• 3. 组蛋白去乙酰化酶 6（HDAC6）14-17
• 3.1 HDAC6 与肿瘤15-16
• 3.2 HDAC6 与病毒16-17
• 4. 研究意义17-19
• 第二部分 实验方法与材料19-43
• 1. 实验材料19-27
• 1.1 细胞系与病毒株19
• 1.2 仪器与耗材19-21
• 1.3 实验试剂及试剂盒21-25
• 1.4 试剂配方25-27
• 2. 实验方法27-43
• 2.1 细胞培养27-30
• 2.2 病毒扩增及滴度测定30-31
• 2.3 抑制剂对细胞的毒性实验31-32
• 2.4 病毒空斑实验32
• 2.5 质粒转化及抽提32-35
• 2.6 干扰RNA或质粒转染到细胞35
• 2.7 实时荧光定量PCR35-37
• 2.8 蛋白质免疫印迹法37-41
• 2.9 免疫共沉淀41
• 2.10 免疫荧光实验41-43
• 第三部分 实验结果43-59
• 1. HSV-1 感染抑制HDAC6 的脱乙酰化酶活性43-45
• 2. HDAC6 抑制剂预处理增强HSV-1 的感染能力45-49
• 3. siRNA干扰HDAC6 促进HSV-1 感染49-50
• 4. 过表达HDAC6 可抑制HSV-1 感染50-52
• 5. HDAC6 活性的调控52-54
• 6. 病毒间层蛋白VP22 参与调控HSV-1 的入核运输54-56
• 7. HDAC6 不通过泛素-蛋白酶体途径降解56-57
• 8. 结论57-59
• 第四部分 讨论与展望59-64
• 1. HDAC6 抑制 HSV-1 的入核运输59-60
• 2. HSV-1 感染过程中 HDAC6 的活性调控60-61
• 3. 展望61-64
• 参考文献64-73
• 附录73-75
• 在校期间发表论文75-76
• 致谢76

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Functional analysis of transcriptional regulation of herpes simplex virus type 1 tegument protein VP22[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2008年11期

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本文编号：260410