江苏省不同口岸白纹伊蚊遗传特征分析

发布时间：2017-03-22 03:18

  本文关键词：江苏省不同口岸白纹伊蚊遗传特征分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的通过对不同基因型的分子标记技术进行比较,选出最适合对白纹伊蚊进行鉴定和遗传分析的分子标记技术。并对江苏省十个口岸的白纹伊蚊进行溯源性分析,揭示白纹伊蚊的分布与地理距离和港口地域的相关性及其遗传特征。 方法提取江苏省十个口岸白纹伊蚊的DNA,将提取的线粒体DNA通过PCR对CoI基因进行扩增测序,测序结果在MEGA上通过ClustalW Multiple alignment模块将碱基对齐并构建邻近法进化树；将核糖体DNA的ITS基因连接到质粒载体中,经克隆后进行测序,通过测序结果构建进化树并进行Mantel检验；对基因组核DNA用AFLP技术进行分析：通过高频/低频剪切酶(EcoRI/MseI)对核DNA进行酶切和连接,通过优化过的十对选择性引物进行再次扩增后,经毛细管电泳构建“0”“1”矩阵,通过NTSYS软件计算遗传相似性系数和进行Mantel检验,并构建UPGMA进化树。通过rDNA的ITS基因和核DNA的AFLP分析对江苏省不同口岸的白纹伊蚊进行同源性分析。 结果通过三种方法对江苏省十个口岸的白纹伊蚊进行鉴定和同源性分析：1.通过对mtDNA-COI基因进行扩增可以很好的对白纹伊蚊进行鉴定,但同源性较高,碱基差异较少,通过进化树分析遗传差异较小,对不同地区的白纹伊蚊不能被很好的区分；2.核糖体DNA的ITS基因通过克隆测序后构建的进化树表明江苏省不同口岸的白纹伊蚊基因序列分为两支,其中,连云港的白纹伊蚊与其他地区的差异较大,单独聚成一支；在另一支中,无锡的白纹伊蚊单独为一支,常州、泰州、徐州和扬州进一步分化成一个小分支,而常州和泰州的白纹伊蚊在此基础上进一步分化为一个较远的小分支；3.对核DNA进行AFLP分析,通过毛细管电泳筛选出了最适合进行白纹伊蚊AFLP分析的十对引物组合,共扩增396条清晰可辨的基因片段,其中包括共有的位点31个,有差异的位点365个,多态性百分率为92.2%,多态性位点丰富,能很好的对白纹伊蚊的遗传差异进行区分。对江苏省十个口岸的白纹伊蚊通过AFLP分析和ITS基因检测的Mantel检验结果表明,白纹伊蚊的遗传距离与地理距离不呈线性相关。而UPGMA进化树在相似性系数0.66处可以将江苏省十个口岸的白纹伊蚊分为三支,常州、淮安、南京、南通、苏州、泰州、徐州、扬州八个地区的白纹伊蚊为一支,无锡和连云港各自分为一支。 结论实验表明rDNA-ITS基因的扩增和核DNA的AFLP分析均能对白纹伊蚊进行同源性分析,但AFLP分析是对全基因组进行分析,能更好的反映出白纹伊蚊的遗传差异。并揭示了不同口岸的白纹伊蚊的遗传距离与地理距离没有相关性,而与港口的地域性密切相关,为进一步的研究奠定了基础。
【关键词】：白纹伊蚊 AFLP ITS COI 溯源分析 沃尔巴克氏体
【学位授予单位】：安徽理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R384.1
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-15
• 注释说明清单15-17
• 引言17-18
• 第一部分 通过三种不同的分子生物学技术对江苏不同口岸白纹伊蚊进行遗传特征分析18-54
• 1.1 前言18-21
• 1.2 实验材料21-25
• 1.2.1 蚊虫标本的采集21-22
• 1.2.2 主要仪器22-23
• 1.2.3 主要试剂23-24
• 1.2.4 主要溶液的配置24-25
• 1.3 实验方法25-37
• 1.3.1 mtDNA-COI基因扩增与溯源分析25-27
• 1.3.1.1 DNA的提取25-26
• 1.3.1.2 mtDNA-CoI基因的PCR扩增26-27
• 1.3.1.3 测序和溯源分析27
• 1.3.2 蚊虫rDNA-ITS基因分析27-31
• 1.3.2.1 rDNA-ITS的PCR产物扩增27-28
• 1.3.2.2 验证28
• 1.3.2.3 割胶纯化28-29
• 1.3.2.4 连接载体29
• 1.3.2.5 化学转化(外源质粒转入大肠杆菌)29
• 1.3.2.6 克隆29-30
• 1.3.2.7 提取质粒30
• 1.3.2.8 质粒验证30-31
• 1.3.2.9 溯源分析31
• 1.3.2.10 遗传距离与地理距离的Mantel检验31
• 1.3.3 核DNA的AFLP分析31-37
• 1.3.3.1 接头制备31-32
• 1.3.3.2 酶切和连接32
• 1.3.3.3 预扩增反应32-33
• 1.3.3.4 初步对选择性扩增反应引物组合进行筛选33-35
• 1.3.3.5 选择性扩增反应引物组合的二次筛选35-37
• 1.3.3.6 江苏不同地区蚊虫的选择性扩增反应37
• 1.3.3.7 遗传关系Mantel检验和聚类分析37
• 1.4 实验结果37-51
• 1.4.1 mtDNA-COI基因扩增与溯源分析37-40
• 1.4.1.1 DNA的提取结果37-38
• 1.4.1.2 mtDNA-CoI基因的PCR扩增38-39
• 1.4.1.3 测序和溯源分析39-40
• 1.4.2 蚊虫rDNA-ITS基因测序与溯源分析40-44
• 1.4.2.1 rDNA-ITS的PCR产物扩增40
• 1.4.2.2 rDNA-ITS基因的克隆40-41
• 1.4.2.3 质粒验证41
• 1.4.2.4 测序和溯源分析41-44
• 1.4.3 AFLP分析44-51
• 1.4.3.1 预扩增反应44-45
• 1.4.3.2 选择性扩增反应引物组合的初步筛选45-46
• 1.4.3.3 选择性扩增反应引物组合的二次筛选46-47
• 1.4.3.4 江苏不同地区蚊虫的选择性扩增反应47-49
• 1.4.3.5 遗传相似性系数及Mantel检验49-50
• 1.4.3.6 聚类分析50-51
• 1.5 讨论51-54
• 第二部分 白纹伊蚊体内共生菌沃尔巴克氏体的研究54-62
• 2.1 前言54
• 2.2 实验材料54-56
• 2.2.1 蚊虫标本的采集54-55
• 2.2.2 主要仪器55
• 2.2.3 主要试剂55-56
• 2.2.4 主要溶液56
• 2.3 实验方法56-57
• 2.3.1 不同口岸白纹伊蚊mtDNA-COI基因扩增56
• 2.3.1.1 DNA的提取56
• 2.3.1.2 mtDNA-CoI基因的PCR扩增56
• 2.3.2 不同口岸白纹伊蚊体内Wolbachia的wsp基因扩增56-57
• 2.3.4 Wolbachia的测序和遗传分析57
• 2.4 实验结果57-61
• 2.4.1 mtDNA-COI基因扩增与溯源分析57-59
• 2.4.1.1 DNA的提取结果57-58
• 2.4.1.2 线粒体DNA的CoI基因扩增58-59
• 2.4.2 白纹伊蚊Wolbachia的wsp基因检测59
• 2.4.3 检出的白纹伊蚊Wolbachia wsp序列测定和溯源性分析59-61
• 2.5 讨论61-62
• 结论62-63
• 参考文献63-68
• 附录A 毛细管电泳结果68-72
• 附录B PCR 2.1 vertor72-73
• 后记和致谢73-74
• 作者简介及读研期间主要科研成果74
• 在读研宄生期间发表学术论文74
• 参与的主要课题74

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 马雅军;吴静;马颖;;基于rDNA-ITS2序列的中国按蚊属塞蚊亚属部分种类的系统发育研究(双翅目:蚊科)[J];昆虫分类学报;2011年04期

2 潘晓玲;刘起勇;奚志勇;;基于昆虫共生菌沃尔巴克氏体的蚊媒和蚊媒病控制研究进展[J];中国媒介生物学及控制杂志;2014年01期

  本文关键词：江苏省不同口岸白纹伊蚊遗传特征分析，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：260791