阿托伐他汀对脑外伤小鼠模型的抗炎和免疫调节机制的实验研究

发布时间：2020-03-31 07:35

【摘要】：背景:创伤性脑损伤(Traumatic brain injury,TBI)中,过度的炎症反应是一种严重的继发性脑损伤,同时具备有益的和致病的双重作用。大量的数据表明,他汀类药物除了具有降脂的作用,还具有广泛的免疫调节和抗炎特性。在他汀类药物中,阿托伐他汀作被证实在实验性TBI模型中具有神经保护作用;然而,关于其对TBI后急性期神经炎症的影响证据不足。目的:本研究目的是:评估阿托伐他汀对创伤性脑损伤急性期免疫调节反应的影响,探讨其对TBI后外周血白细胞侵犯以及对小胶质细胞/巨噬细胞极化的调节作用。方法:利用电子控制性脑皮质撞击仪(eCCI)建立C57BL/6小鼠TBI模型。TBI后1h开始,连续三天口服阿托伐他汀或生理盐水。使用改良的神经系统严重程度评分(mNSS)和转棒实验(Rota-rod)评估TBI小鼠短期神经功能障碍程度。应用免疫组织化学和流式细胞术对入侵脑组织的白细胞亚群进行分析。应用酶联免疫吸附测定(ELISA)的方法检测促炎性和抗炎性细胞因子和趋化因子。通过定量实时PCR(qRT-PCR)和流式细胞术检测M1型和M2型小胶质细胞/巨噬细胞的转化。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色和神经元细胞核(NeuN)的免疫荧光双重染色标记和鉴定凋亡的神经元。结果:阿托伐他汀以1mg/kg/day的剂量治疗可显著减少TBI小鼠神经元凋亡并改善其行为缺陷。阿托伐他汀治疗后,T细胞,中性粒细胞和自然杀伤(NK)细胞的入侵也显著减少,促炎细胞因子(IFN-γ和IL-6)和趋化因子(RANTES和IP-10)的产生也减弱。值得注意的是,阿托伐他汀治疗显著增加了外周脾和脑中调节性T细胞(Tregs)的比例,同时增加了其主要效应细胞因子IL-10和TGF-β1的水平。我们还发现阿托伐他汀显著减弱总小胶质细胞/巨噬细胞的活化,但可通过抑制M1小胶质细胞/巨噬细胞极化和增强M2小胶质细胞/巨噬细胞极化而提高M2/M1比率。结论:我们的数据表明,阿托伐他汀治疗可以有效地调节TBI后过度的神经炎症反应,其机制包括调节外周白细胞的入侵和调节小胶质细胞/巨噬细胞的极化状态。
【图文】：

图 1：图片来自（Yasir N. Jassam, Saef Izzy, Michael Whalen etal.Neuroimmunology of Traumatic BrainInjury: Time for a Paradigm Shift[J]. Neuron. 2017 Sep 13;95(6):1246-1265.）。1.1 对象和方法1.1.1 实验动物6-8 周龄雄性 C57BL/6 小鼠（20-23g）购于北京市维通利华实验动物技术有限公司。本研究的实验方案经天津医科大学总医院动物伦理委员会（中国天津）批准。 所有 C57BL/6 小鼠生活的动物室内环境为：温度控制在（20±2°C）；湿度控制在（55±5％）；保证动物房内要有较亮的工作光线和较暗的生活光线调节（昼夜 12h）；保证小鼠自由的获取食物和水；保障该环境设施符合动物居住的基本要求。小鼠适应新的环境一周左右的时间后，，再进行相关实验，以排除环境变化对实验数据的影响。1.1.2 实验仪器和设备控制性皮层撞击仪 （图 1.1） 美 国 Custom Design &Fabrication 公司

天津医科大学硕士学位论文 一、阿托伐他汀对创伤性脑损伤小鼠急性期免疫反应的影响TRIZOL 试剂 美国 Invitrogen 公司cDNA 合成试剂盒 美国 Invitrogen 公司4',6-二脒基-2-苯基吲哚（dapi） 美国 Invitrogen 公司
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R651.15;R-332

【共引文献】

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本文编号：2608771