NF-κB信号通路中调控蛋白A20与ABIN1在弓形虫诱导人白血病T细胞株增殖和凋亡的作用机制

发布时间：2020-04-12 04:02

【摘要】：目的以弓形虫ME-49感染人T白血病细胞株Jurkat T细胞和Molt-4 T细胞为模型,以NF-κB及其相关调控蛋白为研究对象,分析NF-κB信号通路中调控蛋白A20在弓形虫诱导人白血病T细胞株增殖和凋亡中的作用机制以及ABIN1蛋白对Caspase8蛋白的调控作用,为弓形虫感染诱导人白血病T细胞株凋亡的机制提供较为明确的理论依据。方法1.Tunel,流式细胞术检测Jurkat T与Molt-4 T细胞凋亡情况。2.免疫印迹(Western blotting)检测pNF-κB,A20,ABIN1的蛋白表达水平。3.慢病毒shRNA分别敲低Jurkat T与Molt-4 T细胞的A20与ABIN1基因,结合Western blotting技术检测敲低后各蛋白表达情况。4.ABIN1过表达质粒转染入Jurkat T与Molt-4 T细胞,结合Western blotting技术检测过表达后各蛋白表达情况。结果1.在一定数量的弓形虫ME-49速殖子的作用下,Jurkat T与Molt-4 T细胞的增殖效应被抑制,凋亡水平出现明显增加,且随速殖子数量(5×10~5,1×10~6,5×10~6)的增加而出现显著增加。2.在弓形虫ME-49速殖子的作用下,Jurkat T细胞中的pNF-κB及ABIN1蛋白表达水平随速殖子数量(5×10~5,1×10~6,5×10~6)的增加而出现显著下调(P0.05),A20表达水平随速殖子数量(5×10~5,1×10~6,5×10~6)的增加而显著上调(P0.05),Molt-4 T细胞中也出现类似的变化。3.用慢病毒shRNA敲低Jurkat T细胞中的A20基因后,A20蛋白表达水平出现显著下调,在数量为5×10~6的弓形虫速殖子的作用下,Jurkat T细胞pNF-κB以及ABIN1蛋白水平出现上调(P0.05),凋亡起始蛋白Caspase-8水平出现下调(P0.05),并且细胞凋亡水平出现下降,Molt-4 T细胞中也出现类似的变化。4.用慢病毒shRNA敲低Jurkat T细胞中的ABIN1基因后,ABIN1蛋白表达水平出现显著下调(P0.05),在数量为5×10~6的弓形虫速殖子的作用下,Jurkat T细胞Caspase-8蛋白水平出现明显上调(P0.05),并且细胞凋亡水平也出现明显上升,Molt-4 T细胞中也出现类似的变化。5.将ABIN1过表达质粒转染入Jurkat T细胞后,ABIN1蛋白表达水平出现明显上调(P0.05),在数量为5×10~6的弓形虫速殖子的作用下,Jurkat T细胞Caspase-8蛋白水平出现明显下调(P0.05),并且细胞凋亡水平也出现明显下降,Molt-4 T细胞中也出现类似的变化。结论1.ME-49型弓形虫感染下调T细胞株pNF-κB的表达水平,抑制T细胞增殖,诱导其出现凋亡。2.ME-49型弓形虫上调A20蛋白水平来抑制NF-κB的活化,并下调ABIN1的表达水平。3.增加ABIN1蛋白可以下调Caspase-8蛋白的表达水平,并抵抗弓形虫诱导的T细胞凋亡。
【图文】：

抑制效应,蛋白,机制,细胞

图 1-1.A20 结合 ABIN1 蛋白抑制效应机制20 与细胞内微生物感染A20 在 T、B 细胞中的表达差异20 蛋白在淋巴细胞中的分布存在明显的差异。在 B 细胞中，尤其在 B 细胞淋巴达水平常呈低表达或缺失状态，表现为诱导性表达[12-13]。当外源性抗原，淋巴刺激 B 细胞时，B 细胞能大量诱导 A20 合成，这往往与细胞凋亡密切相关[14]。，A20 水平比较稳定，表现为组成性表达，影响着 T 细胞的增殖和分化[15]。当活剂如 PHA、CD28 刺激 T 细胞后，A20 蛋白表达水平会显著下调，这可能与ALT1（黏膜相关淋巴组织，Mucosal-associated lymphoid tissue）对 A20 的切割们先前的研究证明伊马替尼刺激后 T 细胞 A20 蛋白表达水平出现上调，且 T

表达水平,模型,凋亡抑制蛋白,缺失

图 1-2.A20 与 ABIN1 在不同治疗模型中的表达水平20 的促凋亡效应不能直接促进细胞凋亡，但能通过抑制 NF-κB 相关抗凋亡蛋白表达间人发现淋巴细胞激活剂 PMA/IO 能上调 A20 水平并诱导淋巴细胞凋时间与 A20 蛋白表达量及细胞凋亡率呈正相关。对凋亡抑制蛋白 suA/IO 能下调其表达水平，并在 A20 被沉默后 survivin 表达水平出现上过下调 survivin 表达水平来发挥间接促凋亡效应。Kool[17]等发现 A2中 CD40L 和 RANKL 等促增殖信号通路的敏感性显著提高，并且凋 Bcl-x 的表达水平也在 A20 缺失的情况下明显上调。同时，在缺乏 A胞中，，传统和双阴性 T 细胞出现自发性增殖，且能转变为具有 IFN-这些都与 A20 的缺失导致 NF-κB 过度活化相关。另外，Storz[18]等人
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392

【参考文献】