新型微萃取方法及荧光生物传感技术在生物样品分析中的应用

发布时间：2020-04-12 06:27

【摘要】：生物样品成分复杂、珍贵、稀缺、易失活,给生物样品分析带来了极大挑战。因而生物分析对分析方法的灵敏度和选择性都提出了更高的要求,即分析方法要具备简便、高效、样品用量少、受基质干扰程度小等特点。固相微萃取(SPME)具有样品用量少、萃取效率高、选择性高等特点,与高效液相色谱(HPLC)技术联用适用于多种复杂生物体系分析。生物传感技术具有不需样品分离、高灵敏、分析快速等特点,适用于特征生物分子的分析。针对血药定量分析及肿瘤生物标志物分析两大基本生物分析问题,本论文分别建立了新型固相微萃取-高效液相色谱联用方法和荧光生物传感器。主要研究内容如下:1.通过原位聚合法,以微量吸头为载体制备聚(甲基丙烯酸-乙二醇二甲基丙烯酸酯)(MAA-co-EGDMA)整体小柱用于水样及血浆中育亨宾微萃取。在聚合物的制备过程中,对制备条件进行了系统优化。甲基丙烯酸(MAA)和乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)分别作为功能单体和交联剂,二者摩尔比为1:6;甲醇-二甲基亚砜(7:3)作为混合致孔剂。同时,对聚合物的萃取条件包括洗涤溶剂、上样速率、上样体积和样品溶液pH分别进行了优化,以期获得对育亨宾良好的萃取效果;最后与HPLC联用,用于血浆中育亨宾定量分析。结果表明,建立的方法灵敏度好,检测限低至0.5 ng·mL~(-1);在1.0~2000 ng·mL~(-1)范围内线性关系良好(r~2=0.998),方法重复性良好(RSD%为2.5%)。用于血浆中育亨宾定量分析,回收率良好(97.9~103.8%)。2.上皮细胞粘附分子(EpCAM)在肿瘤的发生发展中扮演着重要作用,被认为是肿瘤诊断、预后和治疗的一种肿瘤信号分子之一。基于适配体与目标分子的特异性识别结合能力以及toehold辅助的DNA循环扩增原理,我们建立了一种用于EpCAM灵敏检测的无酶荧光生物传感器。当目标分子EpCAM存在时,由于其与适配体的特异性结合,探针a从适配体/探针a复合物释放,引发toehold介导的链置换反应。通过探针a的循环利用,实现了荧光信号扩增。本方法用于EpCAM检测获得了良好的选择性和较高的灵敏度,检测限低至0.1 ng·mL~(-1)。同时,该方法成功用于加标人血清中EpCAM的检测,回收率在97.9-103.8%之间。此外,通过选择相应的适配体,该方法还可拓展应用于其他目标物的灵敏检测。
【图文】：

育亨宾,吲哚,化学结构,生物样品

图 2-1 育亨宾（a）和吲哚（b）化学结构Fig. 2-1 The chemical structures of yohimbine (a) and indole (b，，已有 HPLC[24]、LC-MS[25, 26]及 UPLC-MS[27]进行育亨宾分获得了较低的检测限。然而，生物样品（如血液）含有大量

示意图,整体柱,固相微萃取,流程

图 2-2 聚（MAA-co-EGDMA）整体柱的制备及萃取流程示意图Fig. 2-2 Schematic diagrams of preparation processes and extraction procedures.2.2.4 固相微萃取
【学位授予单位】：湖北科技学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R346

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