不同型别肺炎克雷伯菌的毒力基因，ESBL，血清杀菌效果与生物膜形成的关系

发布时间：2020-04-12 07:17

【摘要】：1.呼吸道感染病人临床分离c KP和hv KP的毒力基因、超广谱β-内酰胺酶、血清杀菌效果与生物膜形成的关系背景:临床常见的肺炎克雷伯菌被医生和微生物学家称之为普通肺炎克雷伯菌(c KP)。高毒力肺炎克雷伯菌(hv KP)以荚膜多糖等为主要毒力因子,具有较强的抗血清杀伤作用的能力和生物膜形成能力。本研收集呼吸道感染病人临床分离的c KP和hv KP菌株,检测毒力基因、超广谱β-内酰胺酶、血清杀菌效果与生物膜形成的关系。材料和方法:本实验共收集到肺炎克雷伯菌96株,分离于呼吸道感染患者的痰液。对菌株进行了拉丝试验、药敏试验和ESBL确证试验。PCR反应检测毒力基因。NHS检测血清杀菌作用,微孔板法检测生物膜形成能力。结果:96株临床分离肺炎克雷伯菌株有39株(40.6%)通过拉丝试验被确定hv KP菌株,57株为c KP菌株。药敏实验显示,c KP菌株的耐药程度明显高于hv KP株。c KP株携带ESBL的菌株数量(28/57[49.1%])高于hv KP株(11/39[28.2%])。此外,在c KP菌株中检测到一种或多种类型的ESBL基因,而在hv KP菌株只检测到单一的ESBL基因。在hv KP菌株中多种肺炎克雷伯菌毒力基因如K1、K2、Rmp A、Uge、Kfu和产气菌素等的检出率高于c KP菌株。但是,FIM-1基因和Mr KD3基因的检出率没有很大差异。在c KP株和hv KP株中,ESBL的产出与生物膜形成(both P0.05)密切相关,与血清杀菌作用(both P0.05)也高度相关。但是,在产生ESBL的c KP菌株和hv KP菌株之间生物膜形成和血清杀菌作用没有表现明显差异(both P0.05)。结论:虽然hv KP株中包含更多的毒力基因,但与产生ESBL的c KP菌株相比,生物膜形成能力和血清杀菌作用并没有任何明显的区别。2.测定水杨酸钠和N-乙酰半胱氨酸对荚膜多糖生物合成、生物膜形成以及K1型和K2型hm Kp菌株已形成的生物膜的影响背景:肺炎克雷伯菌携带大量的CPS能防止细菌免受吞噬细胞的吞噬和血清因子的杀伤作用并且可以富集细菌形成生物膜。因此,我们需要一个可以减少CPS产生的一种化学药剂,可以作为hv KP细菌感染的一个有效的辅助治疗手段。实验的主要目的是评估水杨酸钠和N-乙酰半胱氨酸对荚膜多糖生物合成、生物膜形成以及K1型和K2型hv KP菌株已形成的生物膜的影响。材料和方法:临床分离hv KP的K1和K2型菌株被用于以下研究:SAL和NAC在高黏液表型肺炎克雷伯菌、CPS形成、K1和K2基因表达、生物膜形成和对已形成的生物膜的影响。结果:SAL可以明显降低细菌黏性和CPS浓度。此外,实时定量PCR分析表明,SAL下调了CPS合成基因的m RNA水平。而NAC既不影响细菌黏度也不影响CPS合成基因的表达。SAL和NAC都可以抑制生物膜形成并清除已成熟的生物。SAL在浓度为48%(5μg/ml)和84%(100μg/ml)时可以抑制生物膜形成,在浓度12%(5μg/ml)和浓度51%(100μg/ml)时可以清除已成熟的生物膜。NAC在浓度为9%和26%(0.5 and 1 mg/ml)时可以抑制生物膜的形成,在浓度38%和49%(0.5and 1 mg/ml)时可以清除已成熟的生物膜。可见,比起抑制生物膜形成,NAC对成熟生物膜的清除作用占主导地位。SAL和NAC联合应用对于抑制生物膜的合成和对成熟生物膜的清除作用有更加显著的效果。结论:SAL可以抑制hv KP菌株生物膜的形成但是对于已成熟生物膜的清除作用较小。NAC可以很好的破坏已成熟的hv KP株生物膜但是对于抑制生物膜的形成作用较小。因此,SAL和NAC的联合应用对于抑制生物膜形成和清除已成熟生物膜两方面都有很好的效果。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R378

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本文编号：2624437