淫羊藿苷联合左旋多巴对6-羟基多巴胺诱导的帕金森病大鼠模型的影响

发布时间：2020-04-18 14:37

【摘要】：目的:观察淫羊藿苷(Icariin,ICA)联合左旋多巴(L-3,4-Dihydroxyphenylalanine,L-DOPA)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠模型的作用。方法:(1)细胞实验:由6-OHDA诱导PC12细胞损伤模型,实验随机分为空白组、6-OHDA(100μM)组、6-OHDA+ICA(0.1μM)组、6-OHDA+L-DOPA(50μM)组、6-OHDA+L-DOPA(100μM)组、6-OHDA+ICA+L-DOPA(50μM)组和6-OHDA+ICA+L-DOPA(100μM)组。MTT法检测细胞活力。比色法检测细胞内LDH活性。蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测相关凋亡基因BAX和Bcl2蛋白的表达水平。(2)动物实验:SD大鼠中脑炓质单侧注射6-OHDA(8μg)制备帕金森病模型,实验随机分为六组:空白组、ICA(20 mg/kg)组、模型组(6-OHDA,8μg)、6-OHDA+ICA(20 mg/kg)组、6-OHDA+L-DOPA(25 mg/kg)组、6-OHDA+ICA(20 mg/kg)+L-DOPA(25 mg/kg)组。大鼠连续腹腔注射L-DOPA和灌胃ICA,每天一次共21天。用免疫组织化学法检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达,观察给药第7、21天对多巴胺(dopamine,DA)能神经元的数量变化。高效液相电化学法检测大鼠纹状体DA,二羟苯乙酸(dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC),高香草酸(homovanillic acid,HVA)的含量。行为学检测异常不自主动作(abnormal involuntary movement,AIM),前肢运动功能测定(跨步实验)和转棒实验。蛋白免疫印迹法(Western blotting)测定中脑黑质炎症因子COX-2,IL-1β和TNF-α的蛋白表达。结果:(1)细胞实验:与空白组比较,6-OHDA组PC12细胞数量急剧减少,细胞内LDH明显增多,Bax/Bcl-2比例显著升高;经ICA处理后,PC12细胞数量有所增加,细胞内LDH减少;经L-DOPA处理后,细胞内LDH,Bax/Bcl-2比例没有变化;经ICA联合L-DOPA处理后,PC12细胞数量明显增加,细胞内LDH和Bax/Bcl-2比例明显减少(P0.05)。(2)动物实验:与空白组相比,模型组DA神经元明显减少,DA及其代谢产物均减少,大鼠运动协调能力明显下降,COX-2,IL-1β和TNF-α蛋白的表达升高;经ICA处理后,DA神经元增多,大鼠运动协调能力有所提高;经L-DOPA处理后,DA神经元和大鼠运动协调能力没有变化,AIM评分和前肢运动功能明显增加;经ICA联合L-DOPA处理后,DA神经元明显增多,大鼠运动协调能力明显增强,AIM评分显著下降,前肢运动功能有所增加,COX-2,IL-1β和TNF-α蛋白表达减少(P0.05)。结论:ICA联合L-DOPA对6-OHDA诱导的PD大鼠有保护作用,ICA对长期服用L-DOPA所致的异动症有改善作用。
【图文】：

图 1 ICA 联合 L-DOPA 改善 6-OHDA 诱导的 PC12 细胞*P<0.05，与 6-OHDA 组比#P <0.05，，与 6-OHDA+ICA 组比(50 μM)组比χP<0.05，与 6-OHDA+L-DOPA(100 μM)组比ΨFig. 1 ICA combined with L-DOPAprotected against 6-O( x ±SD, n=3). *P<0.05 vs control;#P <0.05 vs 6-OHDA; ωP<vs 6-OHDA+L-DOPA(50μM);ΨP<0.05 vs 6-OHDA+L-DOP图（A & B & C & D）MTT 检测结果；图（E）LDH 检测

21图 3 ICA 联合 L-DOPA 减少黑质 DA 神经元的损失( x ±SD, n=66-OHDA 组比#P <0.05，与 6-OHDA+ICA 组比ωP<0.05，与 6-OHDAFig. 3 ICA combined with L-DOPAprotected DA neurons from 6-neurotoxicity in vivo ( x ±SD, n=6). *P<0.05 vs control;#P <0.05 vs 66-OHDA+ICA;ΨP<0.05 vs 6-OHDA+L-DOPA.图（A & C）免疫组织化学染色结果；图（B & D）转棒实验检测
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R965;R-332

【参考文献】

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本文编号：2632196