胃动素受体在狗胃肠动脉及其神经系统的表达

发布时间：2020-04-25 19:45

【摘要】：背景：胃动素(Motilin, MTL)由22个氨基酸组成,最早被J.C. Brown在猪十二指肠粘膜分离出来,是由小肠上段和空肠黏膜的Mo内分泌细胞合成的一种脑肠肽。胃动素主要通过与胃动素受体相结合发挥作用。米勒等认为,胃动素受体在神经及平滑肌表达不同的结合特性和药理功能,故胃动素受体可分为神经型(N)和肌肉型(M)两种亚型。但在血管上是否存在胃动素受体少有报道。我们课题组在前期试验中发现,在消化间期,狗在意识清醒的状态下,静止期(Ⅰ相)时,胃血流是稳定的,而在收缩期(Ⅱ和Ⅲ相),胃左动脉的血流水平提高到静止期水平的240%,持续可达30分钟。进入静止期30分钟以后,若在狗的静脉内持续性滴注胃动素,可在诱导出现与MMCIII期类似的胃及十二指肠运动的同时,也诱导了胃左动脉血流的增加,其类似于自然发生的周期性胃左动脉血流的变化。当停止输注胃动素时,胃左动脉血流的高度迅速恢复到静止期水平。而胃动素受体拮抗剂(GM-109)则能完全抑制胃动素诱导的和自然发生的周期性胃血流的增加和胃和十二指肠运动,且GM-109持续性输注停止以后,立即出现胃左动脉血流的升高和胃及十二指肠的运动。而在肠系膜上动脉及肠系膜下动脉均未发现上述类似变化。在此次实验中,我们通过对狗胃肠道动脉上胃动素受体表达的研究,从组织细胞层面澄清了胃动素诱发消化间期在体狗胃左动脉周期性舒张的靶受体在胃左动脉内皮细胞膜上,这为进一步研究胃动素对消化间期胃动脉血流量的调节的分子机制提供了有利的支持。胃动素通过与胃动素受体结合,在消化间期周期性地释放并调节胃肠道的移行性复合运动(MMC)。MMC是人和哺乳动物与生俱来的基本运动形式,在整体生命活动中具有非常重要的生理意义,因此研究胃动素受体在整个胃肠道的分布、结构和功能对治疗胃肠动力性疾病具有潜在的临床应用价值。目的：1.研究胃动素受体在离体狗胃动脉上的表达,并与肠动脉的表达强度相比较；2.研究胃动素受体在离体狗的胃肠道管壁的分布并对表达强度进行比较。方法：1.用免疫组织化学方法(S-P法)及免疫荧光双重染色方法检测胃动素受体在狗胃左动脉、肠系膜上动脉、肠系膜下动脉上的表达；2.用RT-PCR法检测胃动素受体mRNA在狗胃左动脉、肠系膜上动脉、肠系膜下动脉上的表达；3.用Western blot法检测胃动素受体蛋白在狗胃左动脉、肠系膜上动脉、肠系膜下动脉上的表达。4.联合应用免疫组织化学方法(S-P法)及RT-PCR法检测胃动素受体在狗整个胃肠道各部位的表达并对表达强度进行比较；结果：1.免疫组织化学方法(S-P法)染色发现胃动素受体位于动脉内皮细胞上,且相对于肠系膜上动脉及肠系膜下动脉,主要在胃左动脉上呈免疫组化强阳性表达,即动脉内皮细胞出现棕黄色或棕褐色颗粒(P0.01)；2.免疫荧光双重染色方法进一步确认胃动素受体位于动脉内皮细胞膜上,且胃左动脉的免疫荧光强度明显高于肠系膜上动脉及肠系膜下动脉(P0.01)；3.RT-PCR法检测到狗胃左动脉、肠系膜上动脉、肠系膜下动脉上胃动素受体mRNA的表达,胃动素受体mRNA的表达量依次为胃左动脉肠系膜上动脉肠系膜下动脉,与免疫组化及免疫荧光结果相一致(P0.01)；4.Western blot法检测到胃动素受体蛋白在狗胃左动脉、肠系膜上动脉、肠系膜下动脉上的表达,在狗胃左动脉表达量最高,其次为肠系膜上动脉,在肠系膜下动脉上最低,这与RT-PCR结果相吻合(P0.01)；5.免疫组织化学方法(S-P法)染色发现胃动素受体在狗胃窦、十二指肠、回肠、空肠、近端结肠、中端结肠的肌间神经纤维和肠肌间神经丛均呈免疫组化阳性表达,而远端结肠呈阴性表达,表达强度由强到弱依次为：十二指肠回肠空肠近端结肠胃窦中端结肠远端结肠(P0.05)；6.RT-PCR法检测到狗胃窦、十二指肠、回肠、空肠、近端结肠、中端结肠胃动素受体mRNA的表达,表达强度由强到弱依次为：十二指肠回肠空肠近端结肠胃窦中端结肠远端结肠(P0.05)。结论：1.胃动素受体位于血管内皮细胞膜上；2.在支配胃肠道的动脉系中,胃动素受体在胃左动脉上呈优势表达,肠系膜上动脉上呈弱阳性表达,肠系膜下动脉呈阴性表达；3.胃动素受体分布于除了远端结肠以外整个狗的胃肠道肌间神经丛和神经纤维；4.胃动素受体在狗胃肠道的表达强度由强到弱依次为：十二指肠回肠空肠近端结肠胃窦中端结肠远端结肠。
【图文】：

Trizol法提取总RNA具体过程

ｃ逡逑图２．３邋ＬＧＡ上ＭＴＬＲ染色（一抗１：１００稀释）逡逑图２．３为ＬＧＡ上ＭＴＬＲ的免疫组化染色（４０0ｘ），阳性染色为沿逡逑动脉内皮出现踪黄色颗粒（黑色箭头）；Ａ；染核的ＬＧＡＭＴＬＲ的逡逑表法；Ｂ；未染核的ＬＧＡ邋ＭＴＬＲ的表达；Ｃ；阴性对照。逡逑４５逡逑
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R333

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本文编号：2640619