低氧对新生隐球菌生物膜影响的初步研究

发布时间：2017-03-24 07:07

  本文关键词：低氧对新生隐球菌生物膜影响的初步研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景和目的新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)是雌雄异株的单倍体担子菌类真菌,它是一种含荚膜的条件性致病真菌,广泛存在于自然界。由于HIV感染和器官移植患者的增加、广谱抗生素和免疫抑制剂的大量使用、侵入性医疗装置的广泛应用等,由新生隐球菌所引起的机会性感染的发生率不断升高。吸入的新生隐球菌能够经血液传播扩散到中枢神经系统,可在患者体内引起致命性的脑膜脑炎,致死率高达90%以上,而且这种感染会造成慢性化或潜伏感染状态。C.neoformans的主要毒力因子包括：荚膜、黑素、尿素酶、磷脂酶及其在宿主体温环境生长的能力等。近年来,研究发现新生隐球菌可在一定条件下形成生物膜,并且研究者认为生物膜的形成也是其重要的毒力因子之一,并逐渐受到人们的重视。生物膜是由细胞菌群及细胞外多聚基质组成的复杂的有机体,它的形成与表面相关。研究显示大于65%的人类感染与生物膜的形成相关。此外,每年由生物膜相关感染导致的死亡人数达50多万。随着内置医疗装置的广泛应用,真菌生物膜引起的相关感染逐渐引起了人们的关注。研究发现,C.neoformans可在血管分流器、腹膜透析瘘管、假体髋关节等多种医疗装置上定植并形成生物膜。这些内置医疗装置,可作为一种基质使真菌定植黏附其上并生长形成生物膜结构,在一定条件下细胞能脱离基质引起严重的真菌血症和/或播散性感染。这些植入相关感染本身就难以解决并可能需要长期抗真菌治疗和移除植入物来控制感染,造成真菌慢性或潜伏感染。因此,真菌生物膜导致的相关感染成为一种日益重要的临床和经济问题,而了解C.neoformans生物膜在感染中的作用将有助于临床抗Cneoformans慢性或潜伏感染治疗。Cneoformans是专性需氧致病酵母菌,它在致病过程中必须要面对宿主体内不同氧浓度的变化。目前国内外的研究多聚集于新生隐球菌低氧适应的机制,但低氧对其主要毒力因子的影响及其机制尚不清楚。我们在前期研究中发现Cneoformans在低氧条件下重要致病表型发生变化,即荚膜和黑素形成减少、尿素酶和磷脂酶活性降低,使Cneoformans在宿主内进入潜伏或慢性状态,导致感染迁延不愈。本研究进一步探讨了低氧对Cneoformans重要毒力因子生物膜的影响,旨在探讨缺氧在C.neoformans潜伏或慢性感染机制中的作用。方法本研究以三气培养箱建立低氧浓度(1%)培养条件,以大气条件为正常氧浓度(21%)培养条件,以新生隐球菌标准株H99株(血清型A,交配型α)为研究对象,采用DMEM培养基24孔板、96孔板培养的方法建立新生隐球菌生物膜体外模型；分别在第2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h取新生隐球菌生物膜用光学显微镜、共聚焦激光扫描显微镜、XTT等方法观察两组氧浓度下新生隐球菌生物膜形成厚度、形态、生长动力学指标。结果两种氧浓度条件下新生隐球菌体外模型均能形成生物膜；两种条件下新生隐球菌生物膜的形成过程相似,均经历黏附、聚集、微菌落形成及生物膜成熟的过程,最终形成厚度约为16μm的成熟的生物膜；生物膜细胞的密度及其生长活性随着培养时间的增加而增加,当其达到一定成熟度后渐趋稳定；与21%氧浓度相比,1%氧浓度下各时间点生物膜细胞密度及生长活性相对较高。结论新生隐球菌能在21%氧和1%氧条件下形成成生物膜结构；两种氧浓度条件下新生隐球菌所能形成生物膜的能力各不相同,低氧可能具有促进其生物膜形成的作用。
【关键词】：新生隐球菌 低氧 生物膜
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R379.5
【目录】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-13
• 前言13-18
• 参考文献15-18
• 一 实验材料18-19
• 1、实验菌株18
• 2、实验试剂18-19
• 3、实验仪器19
• 二 实验方法19-22
• 1、培养基及试剂的制备19-20
• 2、菌悬液的制备20-21
• 3、光镜观察不同氧浓度下新生隐球菌体外生物膜形成21
• 4、共聚焦激光扫描显微镜观察新生隐球菌体外生物膜形成21
• 5、新生隐球菌体外生物膜生长动力学测定实验方法21
• 6、统计分析21-22
• 三、结果22-26
• 1、光镜下新生隐球菌生物膜的形态观察22-23
• 2、共聚焦激光扫描显微镜下观察新生隐球菌体外生物膜形成23-24
• 3、新生隐球菌体外生物膜的生长动力学特点24-26
• 四、讨论26-29
• 参考文献29-33
• 全文总结33-34
• 综述：真菌生物膜的研究进展34-46
• 参考文献42-46
• 附录A 缩略词表46-47
• 附录B 在读期间发表的论文47-49
• 致谢49-50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 孔庆涛;桑红;王乐;曾梅华;王高峰;张敏;吕桂霞;沈永年;刘维达;;不同氧浓度对新生隐球菌尿素酶和磷脂酶的影响[J];医学研究生学报;2012年11期

2 孔庆涛;桑红;;新生隐球菌氧传感途径的研究进展[J];医学研究生学报;2013年10期

3 徐元玲;王建东;蒋琪霞;;慢性伤口细菌生物膜的临床识别和影响因素的研究进展[J];医学研究生学报;2014年12期

4 邓琳;黄苏扬;孔庆涛;李宗辉;桑红;;念珠菌与黑色素的相关性研究[J];医学研究生学报;2015年03期

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本文编号：265240