维生素D受体在SD大鼠原代脂肪细胞分化过程中的表达规律及脂质沉积研究

发布时间：2017-03-24 07:00

  本文关键词：维生素D受体在SD大鼠原代脂肪细胞分化过程中的表达规律及脂质沉积研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：维生素D受体(Vitamin D Receptor,VDR)属于核受体(类固醇激素/甲状腺激素受体)超家族成员,以核受体(Nuclear VDR,nVDR)和膜受体(Membranae VDR,mVDR)两种形式存在,nVDR分子量大约50kDa左右,mVDR分子量大约60kDa左右,在体内主要介导维生素D的细胞作用,被激活的VDR在细胞核内与视黄酸X受体(retinoid X receptor,RXR)形成异源二聚体,结合于靶基因启动子区的维生素D反应元件上,通过直接或间接方式激活下游靶基因的表达,以介导调节体内钙磷平衡、骨盐沉积、细胞的增殖分化及免疫系统功能等生理过程。然而对于VDR是否在脂肪细胞中表达至今在学术界尚存在较大争议。一方面1,25(OH)2D对脂肪细胞分化的作用存在分歧;另一方面,1,25(OH)2D还会影响脂肪因子的分泌,增加了1,25(OH)2D与脂肪组织互作的复杂性。有研究表明,超表达VDR会抑制3T3L1前体脂肪细胞的分化;但在全身性敲除VDR的小鼠体内却表现出体脂减少的现象。因此,有关VDR对脂肪细胞分化的作用及其方式,仍存有争论,需要进一步验证。本研究以体外培养的SD大鼠原代脂肪细胞为研究材料,采用荧光免疫组化法检测VDR及脂质沉积在脂肪细胞分化过程中的变化规律,利用qPCR和Western Blot方法研究原代脂肪细胞中VDR的作用。为1,25(OH)2D预防和治疗肥胖提供理论依据,对机体的代谢健康有重要意义。主要实验结果如下:(1)VDR在SD大鼠脂肪组织及前体脂肪细胞的细胞核中表达;(2)在SD大鼠前体脂肪细胞分化过程中VDR表达规律为先降低后升高,在细胞单层汇合并分化至第8天时,VDR基因表达量最低,蛋白表达量最低,后又有所升高;(3)细胞中脂滴随分化时间的推移逐渐增加,成脂基因PPAR?在分化16天时与VDR表达量差异极显著,具有统计学意义(p0.01)。(4)VDR有可能参与前体脂肪细胞分化过程,并且当细胞中脂滴达到阈值后会反馈调节PPAR?基因的表达,其作为一个潜在的调节因子来抑制细胞继续成脂,但却并不是通过影响PPAR?基因mRNA降解而实现的,其可能直接或间接作用于PPAR?基因的启动子区而发挥一定的转绿调控作用。
【关键词】：维生素D受体 脂肪细胞 PPAR? 免疫荧光染色 Bodipy
【学位授予单位】：陕西理工学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 绪论12-24
• 1.1 维生素受体12-17
• 1.1.1 维生素D受体概述12-13
• 1.1.2 维生素D受体的功能结构域13-16
• 1.1.3 维生素D受体反应元件16-17
• 1.2 PPAR概述17-21
• 1.2.1 PPARγ 与脂肪细胞的关系19-20
• 1.2.2 PPARγ 与疾病信号传导20-21
• 1.3 维生素D受体与脂肪细胞相关研究进展21-24
• 第二章 维生素D受体在脂肪组织中的表达定位研究24-32
• 2.0 引言24-25
• 2.1 试验材料25-26
• 2.1.1 试验动物25
• 2.1.2 抗体及所需试剂25
• 2.1.3 仪器设备25-26
• 2.2 实验方法26-27
• 2.2.1 脂肪组织石蜡切片制作方法26
• 2.2.2 脂肪组织HE染色方法26
• 2.2.3 脂肪组织免疫荧光染色方法26-27
• 2.2.4 肪组织 RNA 提取与反转录方法27
• 2.3 实验结果27-29
• 2.3.1 大鼠皮下脂肪组织HE染色结果27-28
• 2.3.2 大鼠皮下脂肪组织免疫荧光染色结果28
• 2.3.3 大鼠不同部位脂肪组织PCR半定量分析结果28-29
• 2.4 小结29-32
• 第三章 SD大鼠原代脂肪细胞分离培养及诱导分化32-36
• 3.1 试验材料32
• 3.1.1 试验动物32
• 3.1.2 培养基及所需试剂32
• 3.1.3 仪器设备32
• 3.2 实验方法32-33
• 3.2.1 脂肪细胞的分离32-33
• 3.2.2 脂肪细胞的培养33
• 3.3 实验结果33-35
• 3.3.1 脂肪细胞培养结果33-35
• 3.4 讨论35-36
• 第四章 维生素D受体与PPARg基因表达研究36-46
• 4.0 引言36
• 4.1 试验材料36-37
• 4.1.1 试验动物36-37
• 4.1.2 培养基及所需试剂37
• 4.1.3 仪器设备37
• 4.2 实验方法37-39
• 4.2.1 Bodipy染色37
• 4.2.2 细胞免疫荧光染色37-38
• 4.2.3 qPCR检测基因表达量38
• 4.2.4 Western Blot检测蛋白质表达量38-39
• 4.3 结果39-43
• 4.3.1 细胞分化各阶段脂滴荧光染色结果39-40
• 4.3.2 细胞分化各阶段VDR免疫荧光染色结果40-42
• 4.3.3 细胞分化各阶段VDR蛋白表达结果42
• 4.3.4 细胞分化各阶段VDR基因表达结果42-43
• 4.4 讨论43-46
• 第五章 维生素D受体超表达载体构建及功能分析46-56
• 5.1 引言46-47
• 5.2 试验材料47-48
• 5.2.1 细菌及细胞47
• 5.2.2 酶和所需试剂47
• 5.2.3 仪器设备47-48
• 5.3 试验方法48-51
• 5.3.1 引物设计与合成48
• 5.3.2 目的基因的PCR扩增48
• 5.3.3 目的片段和载体的双酶切、回收、和纯化48-49
• 5.3.4 目的基因与载体的连接与转化DH5α49
• 5.3.5 菌液PCR检测阳性菌落49
• 5.3.6 293T细胞及Hela细胞培养49-50
• 5.3.7 重组质粒转染 293T细胞和Hela细胞50
• 5.3.8 Western Blot及qPCR分析50-51
• 5.4 结果51-54
• 5.4.1 目的基因PCR扩增，双酶切及阳性克隆鉴定结果51-52
• 5.4.2 293T细胞及Hela细胞形态观察及质粒转染结果52
• 5.4.3 Western Blot结果52-53
• 5.4.4 qPCR结果53-54
• 5.5 讨论54-56
• 结论56-58
• 小结56
• 创新点56
• 研究展望56-58
• 参考文献58-62
• 中英文缩略词表62-64
• 附图64-66
• 攻读硕士学位期间学术成果66-68
• 致谢68

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  本文关键词：维生素D受体在SD大鼠原代脂肪细胞分化过程中的表达规律及脂质沉积研究，，由笔耕文化传播整理发布。

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