组蛋白甲基化转移酶G9a对NK细胞功能调节作用的研究

发布时间：2020-05-09 15:28

【摘要】：目的:自然杀伤细胞(Natural Killer cell,NK细胞)作为一种固有免疫细胞,在免疫系统中发挥着重要作用。目前关于NK细胞的研究主要集中于NK细胞表面受体以及相关信号通路对其发育和功能的影响等方面,我们研究发现NK细胞在发挥功能时,会伴随着染色质及其组蛋白修饰状态的变化,而组蛋白甲基化转移酶G9a在组蛋白修饰中具有重要的作用,并且组蛋白甲基化转移酶G9a对造血干细胞以及T细胞发育有着重要的影响,另外组蛋白甲基化转移酶G9a是否会影响NK细胞的发育及其功能尚未报道,因此探讨组蛋白甲基化转移酶G9a在NK细胞的作用具有重要意义,本研究主要从表观遗传学的角度探讨G9a如何影响NK细胞的功能及其作用机制。方法:第一部分:从GEO数据库中分析相关数据,在NK细胞免疫信号通路被激活的情况下,寻找表达水平变化最显著的组蛋白甲基化酶和去甲基化酶,发现G9a在NK细胞激活之后显著下调,并用qPCR实验验证G9a的变化。从外周血中分选获得原代NK细胞,加入抑制G9a酶活性的小分子抑制剂,采用western blot方法检测加入小分子抑制剂后,G9a修饰的NK细胞中IFN-γ启动子区域H3K9me2的修饰水平;并用流式细胞术分析NK细胞在被激活的情况下,抑制G9a的酶活性后IFN-γ的表达变化。第二部分:采用qPCR在转录水平检测不同条件激活的NK细胞系的IFN-γ的表达变化,并用流式细胞术和ELISA等技术检测IFN-γ在蛋白水平的表达变化;ChIP-qPCR检测在抑制G9a酶活性前后,NK细胞系中IFN-γ启动子区域H3K9me2的修饰水平变化。结果:第一部分:高通量分析结果显示,NK细胞在被激活的情况下,G9a的表达量下调;在抑制NK细胞中G9a甲基转移酶活性后,可以增强NK细胞分泌IFN-γ的能力。第二部分:通过在转录水平和蛋白水平两个层次上的检测发现,抑制NK细胞G9a甲基转移酶活性后,NK细胞分泌IFN-γ的能力增强;ChIP-qPCR实验结果显示,在抑制G9a的酶活性后,IFN-γ启动子区域基因的H3K9me2修饰水平明显下降。结论:1.G9a可以调控NK细胞的激活。抑制G9a酶活性后,可以显著增强NK细胞的活性。2.G9a通过调控IFN-γ启动子区域H3K9me2的修饰水平来调控其表达,抑制G9a酶活性可以增强NK细胞分泌IFN-γ的能力。
【图文】：

19图 1.1 NK 细胞在被细胞因子激活后 G9a/EHMT2 的表达(A) GO 富集分析激活型的 NK 细胞在功能上的特点。(B)基因芯片分子刺激24h后的NK细胞用相对于本底状态NK细胞组蛋白甲基化酶酶的变化。(C) RT-PCR 检测 G9a 基因的表达，，在 NK 细胞用细胞因子和 IL-18）刺激 24h 后组蛋白甲基化酶 G9a/EHMT2 表达下调。*：p＜0.01；***：p＜0.001。1.2.2 检测抑制原代外周血 NK 细胞中甲基化酶活性的效果根据基因芯片的表达结果，我们发现 G9a 这个组蛋白甲基化酶

学硕士学位论文 一、G9a 状态的改变对激活 NK 细且在 mRNA 水平也验证了这一结果。紧接着我们根据9me2 对淋巴细胞的发育以及功能都有影响，但是对 。所以根据先前的实验结果推测是否抑制了 G9a 的酶能有提高作用？因此，我们从外周血中分选出 NK 细-01294，以 DMSO 为对照组，通过 western blot 实验检-01294 后对 NK 细胞的 H3K9me2 表达的影响（图 1，和 DMSO 处理的 control 组相比，NK 细胞在不同浓理后，总 H3K9me2 甲基化水平明显下降，表明小分子明显的抑制，而 2 μM 浓度的 BIX-01294 抑制效果最为用 2μM 浓度的 BIX-01294 处理 NK 细胞。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392.12

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本文编号：2656351