过继转移日本血吸虫可溶性虫卵抗原致敏鼠CD8α~-树突状细胞抑制OVA诱导过敏性哮喘的作用机制研究

发布时间：2020-05-09 22:44

【摘要】：目的:探究日本血吸虫(Schistosoma japonicum,SJ)可溶性虫卵抗原(Soluble Egg Antigen,SEA)感染鼠树突状细胞不同亚型对卵白蛋白诱导的过敏性哮喘的抑制作用及其作用机制。方法:各取5只SEA感染小鼠和PBS对照小鼠,颈椎脱臼处死,取脾,采用磁珠分选的方法提取分离脾脏CD8α~+和CD8α~-树突状细胞,分别标记为:SEA-CD8α~+DCs,SEA-CD8α~-DCs,PBS-CD8α~+DCs,PBS-CD8α~-DCs。另取30只BALB/c品系雌性小鼠,随机分为6组:正常对照组小鼠,不做任何处理(Normal组),单纯OVA诱导组,不做过继转移DCs处理,仅以OVA诱发哮喘(OVA组),过继转移PBS对照小鼠CD8α~+DCs并诱发哮喘组(PBS-CD8α~+DCs/OVA组),过继转移PBS对照小鼠CD8α~-DCs并诱发哮喘组(PBS-CD8α~-DCs/OVA组),过继转移SEA致敏小鼠CD8α~+DCs并诱发哮喘组(SEA-CD8α~+DCs/OVA组),过继转移SEA致敏小鼠CD8α~-DCs并诱发哮喘组(SEA-CD8α~-DCs/OVA组),在成功诱发哮喘后,处死各组小鼠。1.肺组织病理学检查:解剖小鼠肺组织,制作切片,通过HE染色后,镜下观察小鼠肺组织病理改变程度。2.收集各组小鼠支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF),用ELISA法测定IL-4,IL-5,IL-10,TGF-β的含量。3.解剖小鼠脾脏,制备脾单个细胞悬液,通过OVA刺激后,放置于37℃孵箱中培养72h,收集脾细胞培养上清(Spleen culture supernatants,SCS),采用ELISA方法测定IL-4,IL-5,IL-10,TGF-β的含量。4.每组小鼠通过眼眶收集血液,离心得到血清,采用ELISA试剂盒检测血清OVA特异性IgE的水平。结果:1.小鼠肺组织HE染色镜下观察结果显示:与OVA处理组、PBS-CD8α~+DCs/OVA组、PBS-CD8α~-DCs/OVA组、SEA-CD8α~+DCs/OVA组相比较,SEA-CD8α~-DCs/OVA组炎症反应减轻,炎细胞浸润减少,支气管粘液分泌减少;肺组织病理评分SEA-CD8α~-DCs/OVA组为6.80±1.30分,与单纯OVA组(14.00±1.00分)、PBS-CD8α~+DCs/OVA组(13.00±0.82分)、PBS-CD8α~-DCs/OVA组(12.75±0.50分)、SEA-CD8α~+DCs/OVA组(11.00±0.00分)相比差异均有统计学意义(P0.05)。2.与单独OVA处理组及过继转移其他DCs组相比。SEA-CD8α~-DCs/OVA组BALF和SCS中IL-4、IL-5细胞因子的水平显著下降,且差异均有统计学意义(P0.05)。3.与单独OVA处理组及过继转移其他DCs组相比较。SEA-CD8α~-DCs/OVA组BALF和SCS中IL-10、TGF-β细胞因子的水平显著升高,且差异均有统计学意义(P0.05)。4.与单独OVA处理组及其他过继转移组相比较。SEA-CD8α~-DCs/OVA组血清OVA特异性IgE抗体的含量显著下降,且差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.过继转移SEA感染鼠CD8α~-DCs抑制OVA诱导的过敏性哮喘的发生。2.过继转移SEA感染鼠CD8α~-DCs通过增加IL-10、TGF-β的水平,抑制过敏性哮喘的发生。3.过继转移SEA感染鼠CD8α~-DCs通过降低IL-4、IL-5的水平,减轻过敏性哮喘的炎症水平。
【图文】：

大学硕士学位论文 表 2 小鼠肺组织病理改变得分组别数目 病理总评分（分（n）正常对照组 5 7.00±2.2S-CD8α+DCs 组 5 13.00±0.82S-CD8α-DCs 组 5 12.75±0.50A-CD8α+DCs 组 5 11.00±0.00A-CD8α-DCs 组 5 6.80±1.30*单纯 OVA 组 5 14.00±1.00转移 SEA-CD8α-DCs/OVA 与其他组相比，*P<0.05

气管/血管附近有大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润。气管管壁明显增厚，部分支气管周围可见纤维组织增生度较单纯 OVA 诱导组，过继转移 PBS-CD8α+BS-CD8α-DCs/OVA 组小鼠略有减轻。泡结构被破坏，肺泡壁增厚，肺泡腔萎缩，大量炎性细转移 SEA-CD8α-DCs/OVA 组小鼠肺组织病理染色情况察，过继转移 SEA-CD8α-DCs/OVA 组小鼠肺组织病理未诱导组，过继转移PBS-CD8α+DCs/OVA 及 PBS-CD8α-DA-CD8α+DCs/OVA 组相比较炎症水平显著下降（图 2f气管未见明显粘液潴留。支气管及血管附近未见嗜酸性粒细胞，巨噬细胞等细胞支气管管壁无明显增厚，，病变程度较单纯 OVA 诱导组PBS-CD8α+DCs/OVA，PBS-CD8α-DCs/OVA 及 SEA-CD组小鼠明显减轻。肺泡结构未见明显异常。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R383.24

【参考文献】

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本文编号：2656854