针刺对慢性不可预知应激模型大鼠前额叶JNK信号通路的影响
发布时间：2020-05-18 08:04
【摘要】：研究背景抑郁症是当今社会面临的一项重大的医疗难题,已经成为当代社会最严重的社会问题。挑战抑郁症这一高发病率、高复发率、高致残率的精神疾患,是全人类医学研究的热点。。抑郁症发病机制及治疗效应机制的研究,主要涉及神经递质、神经-内分泌系统、神经元营养与凋亡、细胞因子学说,以及细胞信号转导通路等。JNK信号通路属于MAPK大家族,JNK信号转导通路主要介导细胞外的信号,传导至细胞内,以达到促进细胞增殖分化、凋亡的作用。近年来研究脑区主要集中在海马、前额叶皮质、扣带回、杏仁核、外侧缰核等区域本研究探讨针刺对慢性不可预知应激(CUMS)模型大鼠前额叶JNK信号通路的影响。本研究在前期工作的基础上,继续深入探讨针刺干预对JNK通路中JNK、c-jun、p-c-jun三个密切关键指标的影响。研究目的本研究利用慢性不可预知应激模型激活JNK信号通路,观察CUMS大鼠前额叶皮质JNK信号通路上JNK、c-jun、p-c-jun蛋白表达水平的改变,对课题组前期研究推断进行验证的同时,继续深入探讨,以期完善针刺通过调节JNK信号通路的抗抑郁机制。研究方法1.动物模型选择国际公认的CUMS造模方法:除空白组外,其余大鼠均采用国际公认的CMUS造模方法:应用7种不可预知刺激方法(震荡30min、夜间光照12h、束缚2h、夹尾24h、断食24h、断水24h、潮湿垫料24h),每天选中1种方法,连续刺激21天,平均每种刺激各使用3次。2.干预方法:针刺干预选取“内关”、“三阴交”穴,进针后捻转2min,频率为2次/s,针刺深度为0.5～1cm,留针1Omin,每日一次;氟西汀用蒸馏水配成0.2mg/ml的混悬液,以1.8mg/kg灌胃给药。以上操作时注意尽量减少额外刺激。3.将48只SD大鼠,随机分为8组:空白组、模型组、SP(SP600125,以下简称SP)组、模型+DMSO组(以下简称DMSO组)、模型+氟西汀组、针刺组、模型组+氟西汀+SP组、模型组+针刺+SP组,每组6只。采用慢性不可预知应激(CUMS)法造模,采用侧脑室注射技术侧脑室注射SP600125溶液10 μm。针刺穴位选择“内关”、“三阴交”,每日于造模前干预,每次20min;阳性对照药采用氟西汀1.8mg/Kg灌胃,每日1次。采用旷场实验和体质量来评价实验的行为学,Western-blot法检测大鼠前额叶JNK、c-jun、p-c-jun蛋白的表达。4.处理方法空白组不给予任何刺激,正常群居饲养。其余各组均接受21天慢性应激并单笼饲养。同时,针刺组在每天造模前30mirn进行针刺治疗;氟西汀组每天应激前30min进行氟西汀灌胃给药;DMSO组在应激前1h给于1Oul/1dDMSO侧脑室注射;SP组在应激前1h给予10ul/1d阻断剂SP600125稀释液侧脑室注射;氟西汀+SP组、针刺+SP组在应激前1h给予10ul/1d阻断剂SP600125稀释液侧脑室注射,然后在应急前30min分别给予针刺干预和氟西汀灌胃给药。5.检测方法采用体质量、旷场实验评价抑郁模型大鼠行为学的改变,采用Western Blot法检测前额叶皮质中JNK、c-jun、p-c-jun的蛋白表达水平。研究结果观察大鼠的行为学和检测前额叶皮质中JNK、c-jun、p-c-jun的表达。1.行为学检测:1.1体质量实验0天,各组之间没有显著差异(P0.05)。实验21天,与空白组比较,模型组、DMSO组均下降(P0.01),氟西汀+SP组、针刺+SP组没有显著差异(P0.05)。相较于模型组,SP组、DMSO组没有显著改变,针刺组、氟西汀组均显著上升(P0.01))。与DMSO组比较,SP组、氟西汀+SP组、针刺+SP组没有显著改变(P0.05)。与氟西汀组比较,氟西汀+SP组显著下降(P0.01);与针刺组比较,针刺+SP组显著下降(P0.01)。1.2旷场实验(水平)实验0天,各组之间没有显著差异(P0.05)。实验21天,与空白组比较,各组均下降(P0.01)。与模型组比较,SP组、氟西汀组没有显著差异(P0.05),针刺组显著上升(P0.01)。与DMSO组比较,SP组、氟西汀组没有显著差异(P0.05),针刺组显著上升(P0.01)。与SP组比较,氟西汀组、针刺+SP组没有显著差异(P0.05),氟西汀+SP组、针刺组显著上升(P0.01)。与氟西汀组比较,氟西汀+SP组显著上升(P0.05);与针刺组比较,针刺+SP组显著下降(P0.05)。1.3旷场实验(竖直)实验0天,各组之间没有显著差异(P0.05)。实验21天,与空白组比较,模型各组均显著下降(P0.01)。与模型组比较,氟西汀组、SP组没有显著差异(P0.05),针刺组显著上升(P0.01)。与DMSO组比较,SP组、针刺+SP组、氟西汀+SP组没有显著差异(P0.05)。与氟西汀组比较,氟西汀+SP组没有显著差异(P0.05);与针刺组比较,针刺+SP组没有显著差异(P0.05)。2.前额叶皮质中JNK、c-jun、p-c-jun相关蛋白的表达JNK蛋白的表达与空白组相比,模型组的JNK表达明显上升(P0.001);与模型组相比,SP组、氟西汀组JNK蛋白表达差异没有统计学意义(P0.05),针刺组显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与DMSO组比较,SP组、氟西汀+SP组JNK表达没有显著差异(P0.05),针刺+SP 组 JNK 显著下降(P0.01)c-jun蛋白的表达与空白组相比,模型组的c-jun表达明显上升(P0.001);与模型组相比,SP组、氟西汀组c-jun蛋白表达显著下降(P0.05),针刺组显著下降(P0.01);与DMSO组比较,SP组、氟西汀+SP组c-jun表达没有显著差异(P0.05),针刺+SP组显著下降(P0.05)。p-c-jun蛋白的表达与空白组相比,模型组的p-c-jun表达明显上升(P0.001);针刺、针刺+SP组表达没有显著差异。与模型组相比,SP组有下降趋势(P=0.08)氟西汀组、针刺组显著下降p-c-jun蛋白表达显著下降(P0.01;P0.001)。与DMSO组比较,SP组p-c-jun表达没有显著差异(P0.05),氟西汀+SP组、针刺+SP组p-c-jun显著下降(P0.01;P0.001)结论1.CUMS模型是一个可靠的慢性模型,本实验中反映了抑郁核心症状的两项行为学指标:体质量和旷场行为都显著下降,提示造模成功。2.WB检测结果提示:慢性不可预知应激结合孤养诱导JNK、c-jun、p-c-jun整体上调,提示CUMS模型激活了 JNK信号通路。3.针刺和氟西汀干预可以明显改善CUMS大鼠的抑郁样行为。4.WB检测结果提示:造模后各干预组的JNK、c-jun、p-c-jun不同程度下调,说明慢性不可预知应激状态下JNK信号通路表达的异常可被针刺或氟西汀调节。5.JNK信号通路阻断剂SP600125对JNK信号通路的阻断作用发生在JNK磷酸化之后,位于磷酸化上游的JNK未受到SP600125的影响;氟西汀同样未见作用于JNK蛋白而是干预了下游的c-jun和p-c-jun的表达。针刺干预对JNK信号通路上的JNK、c-Jun、p-c-Jun全程发挥下调作用。6.SP600125、氟西汀和针刺在抑制JNK信号通路磷酸化水平上具有协同作用。创新点:1.在本团队前期工作的基础上,证实了 CUMS大鼠JNK信号通路JNK、c-jun、p-c-jun表达的异常可被针刺调节。2.本研究结果证实:针刺与氟西汀对抑郁模型JNK信号通路作用的差异性表达在JNK磷酸化之后,针刺对JNK信号通路的干预节点位于氟西汀干预的上游。3.本研究结果证实:SP600125、氟西汀和针刺在抑制JNK信号通路磷酸化水平上具有协同作用,这种作用体现在行为学和信号通路指标上。
【图文】：
ＤＭＳＯ组比较，ＳＰ组、氟西汀＋ＳＰＳ１、针刺＋ＳＰ组没有显著改变（Ｐ＞０．０５）。与氟西汀逡逑组比较，铽两汀＋ＳＰ组显著下降（Ｐ＜０．０１）；与针刺组比较，针刺＋ＳＰ组显著下降（Ｐ＜０．０１邋）。逡逑见图１。逡逑０天和２１天体质量（ｇ）逡逑Ｂｏｄｙ邋Ｗｅｉｇｈｔ（ｇ）逡逑４００邋－Ｉ逡逑▲▲邋▲▲逡逑３００．逦：逦＝由桰南逡逑－Ｉ邋ＩｈＩＩｉｉＩ逦ｌｌｌｌｉＭｌｉｉｌ逡逑０天均值逦２１天逡逑□空白组ａ模型组Ｈ邋ＤＭＳＯ组曰Ｓ丨５组口氟西汀组□氟西汀＋ＳＰ组Ｓ针刺组Ｅ针刺＋Ｓ丨５组逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋Ｍｏｄｅｌ逦Ｉ＇ｌｘ逦Ｉ：ｌｘ＋ＳＰ逦Ａｃｕ逦Ａｃｕ＋ＳＰ逡逑图１各组大鼠实验０天和２１天体质量的对比（［±ｓ，６只大鼠／组）逡逑＊＊ｐ＜ｏ．ｏｉ与空白组比较；ｈｐｃａｏｉ与模型组比较。逡逑２．２各组大鼠旷场实验（水１＇：）逡逑实验０天，各组之Ｎ没奋显著差异（Ｐ＞0．0５）。实验２１天，与空白组比较，各组逡逑均下降（Ｐ＜０．０１）。与模型组比较，ＳＰ组、氟西汀组没有显著差异（Ｐ＞０．０５），针刺组逡逑品著上升（Ｐ＜０．０１）。与ＤＭＳＯ组比较，ＳＰ组、氟西汀组没有显著差异（Ｐ＞０．０５），针逡逑刺组显著上升（Ｐ＜０．０１）。４邋ＳＰ组比较，，氟西汀组、针刺＋ＳＰ组没有显著差异逡逑（Ｐ＞０．０５），氟西汀＋ＳＰ组、针刺组显著上升（Ｐ＜０．０１）。与氟西汀组比较，氟西汀＋ＳＰ逡逑－３７邋－逡逑
逡逑组显著上升（Ｐ＜０．０５）；与针刺组比较，针刺＋ＳＰ组显著下降（Ｐ＜０．０５）。见图２。逡逑各组大鼠旷场试验水平运动得分逡逑１00邋］逦Ｔｈｅ邋ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ邋ｍｏｔｉｏｎ邋ｓｃｏｒｅｓ逡逑８０邋－邋ｔ逦丁邋Ｔ逡逑４0■邋ｓ邋途}插澹徨濉濉义希疤戾危玻碧戾义峡诳瞻鬃椋履Ｐ妥椋猓洌恚螅镒椋拢迂咀椋胺魍∽椋胺魍。樱凶椋嵴氪套榭谡氪蹋樱凶殄义希茫铮睿簦颍铮戾澹停铮洌澹戾危疲椋危疲欤樱绣危粒悖蹂澹粒悖酰樱绣义贤迹哺髯榇笫罂醭∈笛樗皆硕梅值谋冉希
本文编号：2669421
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逡逑组显著上升（Ｐ＜０．０５）；与针刺组比较，针刺＋ＳＰ组显著下降（Ｐ＜０．０５）。见图２。逡逑各组大鼠旷场试验水平运动得分逡逑１00邋］逦Ｔｈｅ邋ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ邋ｍｏｔｉｏｎ邋ｓｃｏｒｅｓ逡逑８０邋－邋ｔ逦丁邋Ｔ逡逑４0■邋ｓ邋途}插澹徨濉濉义希疤戾危玻碧戾义峡诳瞻鬃椋履Ｐ妥椋猓洌恚螅镒椋拢迂咀椋胺魍∽椋胺魍。樱凶椋嵴氪套榭谡氪蹋樱凶殄义希茫铮睿簦颍铮戾澹停铮洌澹戾危疲椋危疲欤樱绣危粒悖蹂澹粒悖酰樱绣义贤迹哺髯榇笫罂醭∈笛樗皆硕梅值谋冉希
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