MiR-141-3p在小鼠胚胎成纤维细胞衰老中的作用机制探索

发布时间：2017-03-25 19:06

  本文关键词：MiR-141-3p在小鼠胚胎成纤维细胞衰老中的作用机制探索，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本文通过构建动物和细胞衰老模型,重点研究了衰老过程中miR-141-3p的变化规律,及其相关调控机制。深度测序的结果表明:与年青组SD大鼠相比,虽然成年组脑组织的miR-141-3p水平上调,但老年组显著下调。qPCR检测的结果与深度测序检测的结果趋势相同;且生物信息学分析的结果显示:氧化应激的上游转录调控因子Nrf2的调控基因Keap1是miR-141-3p的靶基因。因而,本文构建了H2O2诱导的NIH3T3细胞衰老模型,结果发现:与正常对照组相比,衰老细胞的生长减缓,SA-β-gal染色阳性率上升,miR-141-3p表达量下降,Keap1和Nrf2蛋白表达量均上升。进而,本文合成了miR-141-3p mimic和inhibitor,研究了它们对衰老细胞模型的作用,结果显示:miR-141-3p mimic能改善细胞的衰老表型,并下调Keap1、Nrf2的mRNA和蛋白表达;而与之相对,miR-141-3p inhibitor会促进细胞的衰老表型,并上调Keap1、Nrf2的mRNA和蛋白表达。综合以上,衰老过程中miR-141-3p的表达下降,可能通过调控Keap1-Nrf2/ARE氧化应激通路,从而加速衰老。
【关键词】：mi R-141-3p 衰老 Keap1 Nrf2 氧化应激
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 一、综述9-16
• 1.1 衰老与mi RNA9-13
• 1.1.1 组织衰老和miRNA10-11
• 1.1.2 细胞衰老和miRNA11-12
• 1.1.3 miRNA衰老研究新思路12-13
• 1.2 氧化应激通路13-15
• 1.3 本论文切入点与实验设计思路15-16
• 二、不同年龄大鼠脑内miR-141-3p的表达变化16-23
• 2.1 引言16
• 2.2 材料与方法16-20
• 2.2.1 实验材料和试剂16-17
• 2.2.2 动物造模17
• 2.2.3 miRNAs抽提17-19
• 2.2.4 miRNAs深度测序19
• 2.2.5 生物信息学分析19-20
• 2.2.6 qPCR验证miR-141-3p的表达量20
• 2.3 实验结果20-23
• 2.3.1 miR-141-3p的差异表达20-21
• 2.3.2 差异表达的miR-141-3p潜在的靶基因和调控通路21-23
• 三、细胞衰老对miR-141-3p及其靶基因的影响23-41
• 3.1 引言23
• 3.2 材料和方法23-35
• 3.2.1 实验材料和试剂23-25
• 3.2.2 细胞造模25-27
• 3.2.3 SA-β-gal染色及活性测定27-28
• 3.2.4 不同浓度H2O2对NIH3T3生长的影响28-29
• 3.2.5 MDA浓度检测29-30
• 3.2.6 生长曲线的测定30
• 3.2.7 qPCR检测miR-141-3p表达量30-33
• 3.2.8 Westren Blot检测Keap1、Nrf2蛋白表达量33-35
• 3.3 实验结果35-41
• 3.3.1 SA-β-gal染色及活性测定35-37
• 3.3.2 生化指标的检测37-38
• 3.3.3 生长曲线38
• 3.3.4 miR-141-3p表达量38-39
• 3.3.5 Keap1、Nrf2蛋白表达量39-41
• 四、miR-141-3p功能分析41-55
• 4.1 引言41
• 4.2 材料和方法41-50
• 4.2.1 实验材料和试剂41-42
• 4.2.2 转染42-43
• 4.2.3 qPCR检测miR-141-3p表达量43-47
• 4.2.4 SA-β-gal活性47
• 4.2.5 qPCR检测Keap1、Nrf2 mRNA表达量47-50
• 4.2.6 Westren blot检测Keap1、Nrf2蛋白表达量50
• 4.3 实验结果50-55
• 4.3.1 转染效率50-51
• 4.3.2 miR-141-3p表达量51
• 4.3.3 SA-β-gal活性51-52
• 4.3.4 Keap-1、Nrf2 mRNA表达量52-53
• 4.3.5 Keap-1、Nrf2蛋白表达量53-55
• 五、讨论与总结55-58
• 参考文献58-65
• 已发表的论文目录65-66
• 致谢66

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 吴刚;王丹;黄毅;韩敬东;;衰老相关microRNAs研究进展[J];生物化学与生物物理进展;2014年03期

2 陈燕;刘娟;陈翰祥;张魏芳;赵蔚明;;miR-17对人包皮成纤维细胞衰老的影响[J];山东大学学报(医学版);2015年05期

3 朱岩;王恩礼;李晖;钟春嫦;刘佳南;段桂开;;MiRNAs在乳腺癌患者血清中的异常表达及其作为潜在诊断标志物的分析[J];中国妇幼保健;2013年29期

4 晋云;江行;卿德科;罗丁;;MiR-122在肝细胞癌中的表达及其与肿瘤表型标志物的相关性研究[J];中华临床医师杂志(电子版);2013年24期

5 谢亮海;吴福生;;miR-122在肝细胞癌中的作用[J];中国老年学杂志;2014年23期

6 Wei WANG;Yun-ping LUO;;MicroRNA在乳腺癌发展过程中的作用机制及临床应用分析(英文)[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2015年01期

7 廖启彬;朱凌燕;张晓燕;徐建青;;微小RNA与人类免疫缺陷病毒1型感染:生物标记及抗病毒治疗[J];微生物与感染;2015年05期

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1 阮胜男;新型IRE1-XBP1抑制剂在他莫昔芬治疗耐药的ER+乳腺癌中的作用及机制[D];华中科技大学;2014年

2 耿力;结直肠癌标志性microRNA分子的筛选及其功能研究[D];吉林大学;2015年

3 彭华;血清noncoding-RNA对非小细胞肺癌与乳腺癌的诊断价值及miR-574-5p与乳腺癌细胞转移相关性研究[D];北京协和医学院;2015年

4 张鹏晖;多功能生物纳米探针用于癌症诊断与药物传输[D];南京大学;2015年

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本文编号：267626