MicroRNA-214对过氧化氢损伤大鼠L6成肌细胞凋亡的作用及机制研究

发布时间：2020-05-28 21:33

【摘要】：目的:骨骼肌成肌细胞移植治疗心梗为病人带来了希望,但在移植治疗过程中,心肌组织缺血缺氧环境下出现的氧化应激会导致移植细胞的凋亡,严重影响治疗效果。本实验拟建立体外L6骨骼肌成肌细胞(L6 Skeletal Myobalst,L6SKM)H_2O_2损伤模型,过表达和抑制microRNA-214(miR-214),研究在氧化应激条件下成肌细胞的凋亡变化并探讨其调控机制。方法:细胞接种于6孔板中,制备细胞爬片或接种于培养瓶中,24h后进行miR-214转染,转染后继续孵育24小时,然后300μmol/L H_2O_2作用4h。实验分六组:H_2O_2组、正常对照组、mi R-214前体+H_2O_2组(pre-miR-214+H_2O_2组)、miR-214前体空白+H_2O_2组(pre-scramble+H_2O_2组)、miR-214抑制剂+H_2O_2组(anti-miR-214+H_2O_2组)、miR-214抑制剂空白+H_2O_2组(anti-scramble+H_2O_2组)。倒置显微镜下观察细胞的形态,SP法检测细胞色素C(Cytochrome C,cyt-c)表达;DAPI染色显示mi R-214对H_2O_2损伤L6SKM细胞凋亡的影响;Western blotting法检测各组PTEN的表达。流式细胞仪检测以上各组及加入人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,pten)抑制剂组后L6SKM的凋亡率。结果:1.miR-214对H_2O_2损伤L6SKM细胞生长及凋亡的影响显微镜下显示,正常组L6SKM生长旺盛,cyt-c免疫染色显示细胞质中可见散在点状的棕黄色颗粒,分布均匀。细胞核为圆型或椭圆形,染色质分布均匀;H_2O_2组细胞生长缓慢,部分L6SKM皱缩,细胞间隙增宽。cyt-c阳性呈弥漫性片状分布,表达明显高于对照组,部分细胞出现异染色质边集或碎裂,凋亡细胞数目明显增加;pre-mi R-214+H_2O_2组的L6SKM生长状态明显好于H_2O_2处理组,cyt-c表达明显低于H_2O_2组,而细胞凋亡率明显低于H_2O_2组;anti-mi R-214+H_2O_2组细胞生长状态明显不如H_2O_2处理组,细胞固缩死亡数目增加。Cyt-c表达明显高于H_2O_2组。DAPI显示凋亡率也高于H_2O_2组。2.miR-214对H_2O_2损伤L6SKM中PTEN蛋白表达的影响Western bolt检测显示,H_2O_2处理引起PTEN表达明显增高,而与H_2O_2组相比,mi R-214的过表达显著降低了PTEN表达,抑制mi R-214的表达使PTEN表达显著升高。3.流式细胞仪检测各组细胞凋亡率H_2O_2组细胞凋亡率(39.47±1.89)明显高于对照组(7.55±0.42),P0.05;pre-miR-214+H_2O_2组细胞凋亡率(18.57±0.97)明显低于H_2O_2组(39.47±1.89),P0.05;anti-mi R-214+H_2O_2细胞组(41.16±2.21)略高于H_2O_2组,无统计学意义,但其晚期凋亡率相对明显升高;pre-miR-214+pten inhibitor+H_2O_2组细胞凋亡率(11.12±0.95)显著低于pre-mi R-214+H_2O_2组(18.57±0.97),P0.05;anti-miR-214+pten inhibitor+H_2O_2组细胞凋亡率(17.63±0.73)显著低于anti-miR-214+H_2O_2组(41.16±2.21),P0.05。结论:1.miR-214过表达可以抑制过氧化氢诱导成肌细胞凋亡。2.miR-214通过下调PTEN,增强PI3K/Akt信号通路活性,达到抑制细胞凋亡的作用。
【图文】：

检测转染后 microRNA-214 的表达，*P<0.05 vNA-214 expression of L6 myoblast after transfecmethod *P<0.05 vs normal

检测转染后 microRNA-214 的表达，，*P<0.05 vsRNA-214 expression of L6 myoblast after transfectimethod *P<0.05 vs normal
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R329.2

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李奇恒;苏继源;吴宗贵;;红细胞凋亡在心血管相关疾病中的研究进展[J];疑难病杂志;2017年02期

2 刘春秋;卞茂红;;药物致红细胞凋亡的研究进展[J];临床输血与检验;2017年04期

3 邓过房;;2016年诺贝尔生理或医学奖背景下的细胞死亡方式再认识[J];中学生物学;2017年05期

4 刘晨;冯雪;;人CXCR4基因对胰腺癌SW1990细胞凋亡和细胞周期的影响[J];健康之路;2017年06期

5 王方;;过表达TIPE2上调BID分子促进H446细胞凋亡[J];科学中国人;2017年18期

6 贾宁;孙荣钊;;病毒感染对细胞凋亡的影响及作用机制[J];中国动物检疫;2012年08期

7 赵君怡;刘伟国;郭秀丽;;一氧化氮与细胞凋亡相关疾病的关系及其调控[J];中国药学杂志;2010年14期

8 黄小丹;;细胞凋亡与疾病[J];畜牧兽医科技信息;2009年05期

9 陈艺娟;邓甲兴;林永利;;中药影响细胞凋亡的研究进展[J];福建畜牧兽医;2008年01期

10 刘伍梅;汪铭书;程安春;周毅;刘芳;张平英;李雪梅;陈孝跃;;PRRSV感染Marc-145细胞凋亡的形态学观察[J];黑龙江畜牧兽医;2008年03期

相关会议论文 前10条

1 李佑生;王文健;刘毅;何春燕;何燕铭;陈伟华;应健;;黄芪多糖丹酚酸对高糖诱导的足细胞凋亡的影响[A];中华中医药学会血栓病分会第四次学术研讨会暨广东省中医药学会血栓病专业委员会首届学术研讨会论文集[C];2010年

2 覃玉荣;张志勇;;细胞浓度变化对细胞凋亡率影响及其机理初探[A];全国电磁兼容学术会议论文集[C];2006年

3 于青;袁伟杰;姚建;;晚期糖基化终末产物引起足细胞凋亡的机制[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年

4 吴经纬;汤长发;;运动中细胞凋亡的线粒体变化特征[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年

5 蒲小平;李长龄;屠鹏飞;宋志宏;;中药肉丛蓉成分抗神经细胞凋亡的实验研究[A];第七届全国生化药理学术讨论会论文摘要集[C];2000年

6 林其谁;;线粒体与细胞凋亡[A];第七届全国生物膜学术讨论会论文摘要汇编[C];1999年

7 邱洁;高海青;;锌在细胞凋亡中的作用研究进展[A];山东省微量元素科学研究会第三届学术研讨会论文汇编[C];2006年

8 宁存德;;细胞凋亡与口腔疾病[A];FDI、CSA临床口腔进展学术会议论文汇编[C];1999年

9 华子春;;靶向性诱导肿瘤细胞凋亡药物研发[A];全国第十一届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2009年

10 王娅婷;韦四喜;柴其翔;章亚明;方琴;王季石;;苯乙基异硫氰酸酯诱导K562细胞凋亡及其机制研究[A];中国肿瘤内科进展 中国肿瘤医师教育（2014）[C];2014年

相关重要报纸文章 前10条

1 ;“细胞凋亡疗法”正逐步成为治疗癌症的新途径[N];中国高新技术产业导报;2002年

2 记者 何德功;基因变异可能致癫痫[N];新华每日电讯;2004年

3 ;3’取代吲哚类衍生物诱导HL－60细胞凋亡的实验研究[N];中国医药报;2003年

4 ;As_(2)S_(2)与STI571协同诱导K562细胞凋亡[N];中国医药报;2003年

5 董学清 吴延华;阿胶抑癌作用显著[N];中国医药报;2003年

6 高书明;诱导癌细胞凋亡[N];中国医药报;2004年

7 杨堤林;中药可诱导肿瘤细胞凋亡[N];中国中医药报;2004年

8 记者张建松;治疗癌症新途径：细胞凋亡疗法[N];科技日报;2002年

9 商东;“细胞凋亡”与临床医学[N];中国医药报;2001年

10 张志军;细胞凋亡与中医药[N];中国医药报;2002年

相关博士学位论文 前10条

1 刘镭;香豆素类化合物抗鲤春病毒血症病毒活性及作用机制研究[D];西北农林科技大学;2018年

2 周瑶;活血清利解毒中药治疗慢性肾脏病的机理研究[D];南京中医药大学;2018年

3 岳永强;血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白促进血管平滑肌细胞凋亡并抑制内膜增生的机制研究[D];郑州大学;2018年

4 梁佩淇;N-乙酰基转移酶10在急性髓细胞白血病中的作用及机制研究[D];中国医科大学;2018年

5 郑旭;白藜芦醇对甲状腺癌防治作用的实验研究[D];大连医科大学;2018年

6 孙同友;环化变构TRAIL联合5-FU抗结直肠癌作用研究[D];河北医科大学;2018年

7 黄海剑;褐飞虱唾液蛋白功能及唾液腺在水稻齿叶矮缩病毒传播中的作用机制研究[D];浙江大学;2017年

8 崔香丹;草苁蓉环烯醚萜苷对肝癌的抑制作用及其机制的实验研究[D];延边大学;2018年

9 贺丹;miR-137靶向TNFAIP1调节Aβ诱导的神经毒性致病机制研究[D];郑州大学;2017年

10 陈星华;c-Abl在血管紧张素II诱导足细胞凋亡中的作用及其机制研究[D];武汉大学;2013年

相关硕士学位论文 前10条

1 徐洋;鸭瘟病毒US5基因抑制双氧水诱导的细胞凋亡的初步研究[D];四川农业大学;2017年

2 王小燕;Rap2b通过与线粒体蛋白相互作用调节细胞凋亡的研究[D];扬州大学;2018年

3 田园;MicroRNA-214对过氧化氢损伤大鼠L6成肌细胞凋亡的作用及机制研究[D];河北医科大学;2018年

4 黄选洋;MAPK介导钒引起蛋鸡输卵管膨大部上皮细胞氧化应激和细胞凋亡的研究[D];四川农业大学;2017年

5 付饶;山羊ATF6干扰慢病毒载体构建及其对胎盘滋养层细胞凋亡的影响[D];西北农林科技大学;2018年

6 严磊;MPTP在庆大霉素致MDCK细胞凋亡中的作用及依达拉奉的保护效应[D];扬州大学;2018年

7 肖隆华;不同致病型DHAV-1致细胞凋亡及部分血清酶比较[D];福建农林大学;2018年

8 司梦雪;Fas介导的信号通路在ZEA致睾丸支持细胞凋亡中的作用研究[D];扬州大学;2018年

9 靳艾;DHA诱导草鱼脂肪细胞凋亡的作用及其机制研究[D];西北农林科技大学;2018年

10 李光辉;mTOR信号通路在雷帕霉素调控锰诱导MN9D细胞凋亡中的作用研究[D];遵义医学院;2018年

本文编号：2685871