蒲公英甾醇对小鼠酒精性和免疫性肝损伤保护作用及机制研究

发布时间：2020-05-29 00:28

【摘要】：蒲公英甾醇(Taraxasterol)是一种从传统中药蒲公英中提取出来的五环三萜类的化合物,它有广泛的药理活性。本试验通过建立ConA和乙醇诱导的小鼠肝损模型,来探究蒲公英甾醇对小鼠免疫性和酒精性肝损伤的保肝作用及其机制,为蒲公英甾醇应用于临床提供理论基础。小鼠酒精性肝损伤模型:将小鼠分为6组,即空白组、EtOH组、硫普罗宁组(TPN组)、蒲公英甾醇组(10、5、2.5mg/kg)。各组小鼠每日灌胃相应剂量的药物和50%的乙醇,各1次/d,连续15 d。末次口服乙醇12h后,取血和肝脏。计算小鼠肝脏指数;测定小鼠血清中AST、ALT、TG、ADH和LDH的含量、小鼠肝脏中TG、MDA、GSH、SOD的活性和ROS的含量;ELISA法测定小鼠血清中TNF-α和IL-6的含量;通过免疫组化和Western blot法来检测小鼠肝脏中含有的CYP2E1蛋白的表达;通过Western blot法检测小鼠肝脏中Nrf2、HO-1、IκBα和p65的蛋白表达。小鼠免疫性肝损伤模型:将小鼠随机分为6组,即空白组、ConA组、联苯双酯组(Bif组)、蒲公英甾醇组(10、5、2.5mg/kg)。除空白组和Con A组外,其他各组每日口服相应剂量药物,1次/d,连续7 d。末次给药1h后,小鼠尾静脉注射18 mg/kg的ConA溶液,8 h后,取血和肝脏。计算小鼠肝脏和脾脏指数;测定小鼠血清中AST、ALT的含量、肝脏中MDA、GSH、SOD 的活性;ELISA 法测定小鼠血清中 TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-y和 IL-4的含量;利用TUNEL法来检测肝脏细胞的凋亡情况;通过Western blot法检测小鼠肝组织中TLR2、TLR4、p65、Bax和Bcl-2的蛋白表达,计算Bax/Bcl-2的比值。与EtOH组相比,蒲公英甾醇能显著或极显著降低酒精肝小鼠肝脏指数、血清中ALT、AST、TG、ADH、LDH的含量、小鼠肝组织中TG、MDA和ROS的含量(P0.05或P0.01)、增强小鼠肝组织中GSH和SOD的活性(P0.05或P0.01);蒲公英甾醇能显著或极显著抑制小鼠血清中TNF-α和IL-6的分泌(P0.05或P0.01);蒲公英甾醇能显著或极显著下调小鼠肝组织中CYP2E1和p65蛋白的表达、显著或极显著抑制IκBα蛋白的降解,显著或极显著上调肝脏中Nrf2和HO-1蛋白的表达(P0.05或P0.01)。与ConA组相比,蒲公英甾醇能显著或极显著降低小鼠肝脏和脾脏指数、小鼠血清中ALT、AST的含量、小鼠肝组织中MDA的含量(P0.05或P0.01)、增强小鼠肝组织中GSH和SOD的活性(P0.05或P0.01);蒲公英甾醇能显著或极显著抑制血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-y和IL-4的分泌(P0.05或P0.01);蒲公英甾醇能显著或极显著下调小鼠肝组织中TLR2、TLR4和p65蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2的比值(P0.05 或P0.01)。结论:上述结果表明,蒲公英甾醇通过降低机小鼠血清中ALT、AST等酶类的活性,增加抗氧化酶的活性,减少脂质过氧化的发生,调控NF-κB通路中关键因子IκBα和p65蛋白的表达,上调Nrf2和抗氧化酶HO-1来抑制氧化应激的产生,对乙醇诱导的小鼠肝损伤起到保护作用;蒲公英甾醇通过抑制细胞因子的分泌,下调NF-κBp65蛋白和Bax蛋白的表达、上调Bcl-2蛋白的表达,降低Con A对肝细胞造成的损害和凋亡,从而对Con A所致的肝损伤起到保护作用。
【图文】：

ｐ６５的蛋白表达的影响逡逑１．１０．１蒲公英甾醇对酒精肝小鼠肝脏中ＣＹＰ２Ｅ１蛋白表达的影响逡逑由Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ结果（见图３）可知：相较于空白组，ＥｔＯＨ组肝脏中ＣＹＰ２Ｅ１逡逑１８逡逑

注：与空白组比较：＃＃户＜0．0丨；与ＥｔＯＨ组比较：７＞＜０．０５，＂户＜０．０１。逡逑１．１０．２蒲公英甾醇对酒精肝小鼠肝脏中Ｎｒ。蛋白表达的影响逡逑由Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ结果（见图４）可知：相较于空白组而言，ＥｔＯＨ组肝脏中逡逑Ｎｒｆ２蛋白表达量出现极显著的下降（尸＜0．0１）。与ＥｔＯＨ组相比，蒲公英甾醇高、逡逑中剂量组能极显著上调小鼠肝脏中Ｎｒｆ２蛋白的表达（户＜０．０１），低剂量组能显逡逑著上调小鼠肝脏中Ｎｒｆ２蛋白的表达（Ｐ＜０．０５）。由此可知，，蒲公英甾醇通过上逡逑调酒精性肝损伤小鼠肝组织Ｎｒｆ２蛋白的表达，增加核转入量，进而激活下游抗逡逑氧化蛋白的表达，增强机体的氧化防御系统，以达到保肝的目的。逡逑１９逡逑
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332

【参考文献】

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本文编号：2686080