Sel1L分子对骨髓源树突状细胞的影响

发布时间：2020-05-29 03:15

【摘要】：目的:Sel1L(Suppressor/Enhancer of Lin-12-like)是内质网上的羟甲基戊二酰基还原酶降解蛋白1(Hrd1)的衔接蛋白,其构成的Sel1L-Hrd1复合物可以通过对免疫细胞的蛋白质合成的调控,从而调节免疫细胞的功能。有研究表明,Sel1L参与自身免疫性疾病及多种癌症类型的肿瘤的发生、发展,而树突状细胞在激发免疫应答以及免疫耐受方面起重要作用。本文构建Sel1Lf/fCD11c-Cre+/-基因敲除小鼠模型,研究Se1l L对骨髓源树突状细胞功能的影响。方法:1.采用Cre-Loxp重组酶系统构建DCs细胞特定基因敲除小鼠模型。将Sel1Lf/f小鼠与CD11c-Cre+/-小鼠(C57BL/6背景)进行杂合,其子代小鼠的基因型经PCR鉴定后,筛选出Sel1Lf/f CD11c-Cre+/-小鼠。2.取适龄的野生型(WT)小鼠及敲除型(KO)小鼠,分别称取两组小鼠的体重以及脾脏的重量,并进行拍照。3.脾脏组织切片用HE染色进行观察。采用流式分析小鼠脾脏中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、B220+B细胞、CD11c+细胞及c DCs亚群比例变化。流式检测CD11c+细胞表面共刺激分子及抗原提呈分子的表达情况。4.用GM-CSF、IL-4诱导培养BMDCs,LPS刺激成熟后,收集细胞及上清。Western blot检测BMDCs中Sel1L的表达情况。流式检测CD11c+DCs群体数及CFSE的变化。流式分析BMDCs表面CD80、CD86、MHC-I及MHC-II的表达情况。ELISA和q RT-PCR检测炎症相关分子IL-6和IL-12的表达水平。流式检测DCs诱导抗原特异性CD4+T细胞及CD8+T细胞增殖的能力。结果:(1)与野生型小鼠相比,敲除型小鼠的脾脏重量明显增大,肉眼观察其发生明显充血肿胀变大,组织切片显示脾脏的白髓区相对明显变小。(2)流式结果表明Sel1L的缺失使脾脏的CD8+T细胞数量降低。敲除型小鼠的脾脏中CD11c+细胞数量升高,c DCs亚群中c DC1s数量明显降低而c DC2s数量升高,同时BMDCs细胞在诱导分化过程中的增殖效率受到抑制。(3)敲除型小鼠DCs分泌炎症因子的能力及MHC-I的表达升高,增强对CD8+T细胞的激活,同时MHC-II的表达显著降低,抑制CD4+T细胞的增殖。结论:在DCs中特异性敲除Sel1L,降低BMDCs分化效率,促进炎性因子分泌,并调控其抗原提呈功能,在激发免疫应答中发挥重要作用。
【图文】：

DCs的发育过程

Sel1L 分子对骨髓源树突状细胞的影响 其激活后，上调 MHC-II 和共刺激分子，并快速产生大量的 I 型和 III 型 IFN，影响其他免疫效应细胞如 cDCs、NK 细胞、CTL 和辅助性 T 细胞，，从而介导抗病毒免疫反应[35]。小鼠 pDCs 的抗原呈递及激发 T 细胞能力很弱，但其在介导外周免疫耐受方面发挥重要作用[36]。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 卢伸;王青青;;第14届国际树突状细胞会议热点解读[J];浙江大学学报(医学版);2017年01期

2 ;中国医科院揭示树突状细胞启动“经典免疫”的调控机理[J];生物学教学;2017年01期

3 钟贵文;;“吞噬细胞”及其在免疫中的作用探究[J];中学生物教学;2017年Z1期

4 ;第14届国际树突状细胞研讨会会议通知[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2016年03期

5 ;第14届国际树突状细胞研讨会会议通知[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2016年04期

6 曹华;薛峰;陈小英;李霞;陈雪华;郑捷;;链球菌诱导外周血单个核细胞来源的树突状细胞的成熟[J];中国皮肤性病学杂志;2013年12期

7 马金柱;宋佰芬;崔玉东;;树突状细胞免疫功能的研究进展[J];中国预防兽医学报;2012年02期

8 桂琳;李静;陈宝安;;白血病树突状细胞体外培养影响因素的研究[J];中国实验血液学杂志;2010年06期

9 ;封面图片——树突状细胞[J];中国厂矿医学;2009年04期

10 ;科学家发现树突状细胞调节新机制[J];生物学通报;2007年11期

相关会议论文 前10条

1 王玉忠;邢春叶;王倩;石其光;冯勋刚;郝延磊;;树突状细胞亚群在吉兰-巴雷综合征发病中的作用[A];中华医学峰会暨中华医学会神经病学分会第八届全国中青年神经病学学术会议论文汇编[C];2015年

2 王玉忠;邢春叶;王倩;石其光;冯勋刚;郝延磊;;树突状细胞亚群在吉兰-巴雷综合征发病中的作用[A];中华医学会第十八次全国神经病学学术会议论文汇编（上）[C];2015年

3 时建铨;张颖冬;周俊山;田有勇;赵红东;;Aβ1-15诱导小鼠髓源树突状细胞的正确功能[A];中华医学会第十七次全国神经病学学术会议论文汇编（上）[C];2014年

4 郝群;梁元姣;吴元赭;汪灏;;应用基因表达谱芯片研究人树突状细胞成熟前后免疫相关基因的差异表达[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年

5 蒋应明;万涛;陈国友;夏大静;周向阳;修方明;张意;曹雪涛;;树突状细胞来源的钙粘着相关蛋白新基因的克隆、表达及功能研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

6 王胜军;王丽莉;李坚;许化溪;;肺癌患者胸水中树突状细胞的诱导和初步鉴定[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

7 徐克成;牛立志;郭子倩;张德春;左建生;;树突状细胞及其在癌肿治疗中应用[A];中国中西医结合学会第十五次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2003年

8 何广胜;邵宗鸿;和虹;刘鸿;施白;洁均;曹燕然;Q

本文编号：2686301