Toll样受体2介导慢性痒的机制研究

发布时间：2020-05-29 08:40

【摘要】：目的:瘙痒作为一种引起人强烈不适的感觉,常常出现在各种不同的慢性皮肤病中,而银屑病和干皮病的典型症状就是瘙痒,它严重影响患者的生活质量。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)作为一种模式识别受体常常在免疫疾病中发挥作用,但已有数据表明TLRs也参与了瘙痒疼痛,因此本文聚焦于TLR2和银屑病、干皮病,探究TLR2和慢性痒之间的关系。首先检测银屑病和干皮病小鼠模型中TLR2m RNA及蛋白的变化,然后通过药理学、行为学、分子生物学等方法,探究TLR2信号通路调控慢性瘙痒的分子机制。方法:1在野生型小鼠和TLR2 KO小鼠颈背部注射CQ、Compound 48/80、Substance P、ET-1,观察小鼠搔抓行为,检测急性痒变化。2将野生型小鼠分为两组,一组不做处理,另一组建立慢性痒模型;TLR2 KO小鼠分为两组,一组不做处理,另一组建立慢性痒模型。造模过程中在特定时间点观察小鼠搔抓行为,检测自发痒和触诱发痒变化。造模七天后取皮肤组织,运用HE染色技术检测皮肤的病理变化;运用实时定量PCR、Western blotting技术检测TLR2 m RNA、蛋白表达量;运用Q-PCR技术检测趋化因子CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL7、CXCL8和趋化因子受体CXCR1、CXCR2的m RNA变化量。3将野生型小鼠分为两组,一组不做处理,另一组建立慢性痒模型。造模七天后,在两组小鼠颈背部皮内注射CXCR1、CXCR2的抑制剂,观察小鼠搔抓行为,检测瘙痒变化。4将野生型小鼠随机分组,在小鼠的颈部通过皮内注射分别给予小鼠CQ、CQ+CXCR1/2的抑制剂混合液,Compound 48/80,Compound 48/80+CXCR1/2的抑制剂的混合液。每组6-10只,观察小鼠搔抓行为,检测急性痒变化。5应用Western blotting技术确定PGN-SA孵育Ha Ca T细胞系后p65和p38磷酸化情况。6在Ha Ca T细胞系中先孵育p65和p38的抑制剂后再用PGN-SA孵育Ha Ca T细胞系,运用实时定量PCR技术确定趋化因子CXCL1、CXCL8的表达情况。7小鼠颈背部皮内注射趋化因子CXCL8,观察搔抓行为,检测CXCL8诱导急性痒情况。8将野生型小鼠用咪喹莫特处理建立慢性痒小鼠模型,造模成功后随机分为三组,在颈背部分别皮内注射生理盐水、0.1μg趋化因子CXCL8、0.3μg趋化因子CXCL8,观察搔抓行为,检测CXCL8能否增加慢性痒小鼠模型的瘙痒。结果:1转棒、热板、甩尾、von Frey以及脚底注射福尔马林行为学结果显示,TLR2缺失后运动功能无变化,痛阈增加。2 TLR2基因敲除小鼠后能降低CQ、Compound 48/80、Substance P、ET-1诱发的瘙痒。3咪喹莫特乳膏和AEW处理后,TLR2基因敲除小鼠慢性痒模型中,瘙痒减少,皮肤厚度变薄。4 Q-PCR和Western blotting结果显示,慢性痒模型皮肤中TLR2 m RNA、蛋白表达量增加,DRG中CXCR1、CXCR2的m RNA表达上调。TLR2基因敲除小鼠中,缓解了皮肤中CXCL1、CXCL8 m RNA的上调。5皮内注射CXCR1/2的抑制剂Reparixin及CXCR2的拮抗剂SB225002能降低银屑病和干皮病模型的自发痒。6皮内注射CXCR1/2的抑制剂Reparixin及CXCR2的拮抗剂SB225002能减少CQ、Compound 48/80诱发的抓挠次数。7 Q-PCR和Western blotting结果显示,PGN-SA孵育Ha Ca T细胞系后P-p65和P-p38蛋白、CXCL1及CXCL8 m RNA表达上调。8 Q-PCR结果显示,用NF-κB抑制剂PDTC抑制p65磷酸化可缓解PGN-SA导致的Ha Ca T细胞系CXCL1、CXCL8 m RNA表达上调。9皮内注射趋化因子CXCL8可诱发急性痒,低剂量趋化因子CXCL8增加银屑病和干皮病模型的自发痒。结论:1 TLR2参与急性痒和慢性痒2 TLR2通过NF-κB信号通路调控皮肤角质细胞CXCL1、CXCL8的表达3 TLR2可能通过调控CXCL1、CXCL8介导慢性痒。
【图文】：

图 1 TLR2 对小 础 影 。（A）转棒检测 WT 和 TLR2 KO 运动功能（B ）热板和（C）甩尾检测 WT 和 TLR2 KO 热 应。（D-E）von Frey 检测WT 和 TLR2 KO 械 应。（F-G）足 注射福尔马 检测 WT 和 TLR2 KO

Toll 样受体 2 介导慢性痒的机制研究性 应。（n=6-8；*P < 0.05；**P < 0.01；非 对 t 检验；所 数据均以Mean±SEM 表 ）3.2 TLR2 介导小鼠的急性痒为了验证 TLR2 KO 是否参与小鼠的急性痒反应，我们在小鼠颈部进行皮内分别注射 CQ、Compound 48/80、Substance P、ET-1 等致痒剂。结果显示：与野生型小鼠相比，TLR2 KO 鼠中 CQ、Compound 48/80、Substance P、ET-1 诱发的抓挠次数降低（t=2.163，P=0.0451；t=2.161，P=0.0444；t=2.898，P=0.0083；t=2.556，，P=0.0198；图 2 A-D），表明 TLR2 敲除后能够缓解急性痒。第3章 结果
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R338

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本文编号：2686679