多巴胺对精神分裂症动物模型小鼠海马γ振荡的影响及机制研究
发布时间：2020-05-31 13:46
【摘要】：背景杂合子reeler小鼠(reelin单倍体不足)与精神分裂症患者有许多神经化学和行为上的相似性,提供了一个可用的动物模型来研究精神分裂症等神经精神疾病。已有证据显示reelin信号传导缺陷以特定的方式影响中脑边缘多巴胺能通路。我们研究了多巴胺(Dopamine,DA)对杂合子reeler小鼠海马脑片CA3区γ振荡的影响及可能的机制。目的探讨杂合子reeler小鼠作为精神分裂症的模型,在海马是否存在DA系统功能的紊乱及其可能的机制,探讨DA系统功能紊乱与reelin信号通路的关联,为揭示精神分裂症DA系统功能障碍的病理机制及抗精神病药物的研发提供新的思路。方法1.行为学实验利用Y迷宫和Morris水迷宫对野生型和杂合子reeler小鼠进行依赖于海马的空间记忆功能的测试。2.离体海马脑片的细胞外场电位记录创建恒温界面式浴槽灌流系统,腹腔注射10%水合氯醛(0.3-0.4ml/100g)麻醉小鼠。逐层打开胸腔,暴露心脏,剪开右心耳,于左心室处灌注预冷(-4℃)的30ml切片脑脊液(pH:7.35~7.5),断头取脑。取出的脑组织用振动切片机水平切出含有海马组织的脑片。切片完成后,将脑片放置于孵育槽上,循环灌流脑脊液孵育一小时左右。将脑片放置于记录槽中,采用细胞外微电极方式记录海马脑片CA3区γ振荡,达稳态后加入不同通道受体的抑制剂或激动剂,观察药物对γ振荡的影响,从而揭示其机制。3.统计分析所有数据统计均使用IBM SPSS Statistics 22软件进行。经Shapiro-Wilk检验数据正态性后,选择参数检验或非参数检验。参数检验统计结果以均值±标准误差的方式表示。非参数检验统计结果以中位数±四分位数间距的方式表示。检验水准:α=0.05。结果(1)海马依赖性的学习记忆无差异;(2)DA增强野生型小鼠γ振荡,但杂合子reeler小鼠对DA反应不敏感;(3)阻断NMDA受体部分阻断DA对野生型小鼠γ振荡的增加作用,而阻断NMDA受体部分恢复杂合子reeler小鼠对DA的反应;(4)阻断PI3K之后DA对野生型小鼠的增加作用无影响,阻断PI3K却完全恢复杂合子reeler小鼠对DA的反应。结论我们的研究结果揭示杂合子reeler小鼠存在DA系统功能的紊乱,而DA系统功能紊乱与NMDA受体的过度激活有关。
【图文】：
程序为: 94℃预变性 5 min; 94℃变性 30 s, 53℃退火 30 s（Re40 个循环; 72℃延伸 10 min.增产物直接进行琼脂糖电泳检测。尔基因分离规律和自由组合规律，第 2 代小鼠可能具有以下合子 reeler 小鼠，杂合子 reeler 小鼠。由于 Reelin 纯合子有 鉴定，因此只需鉴定 Reelin 杂合子和野型纯合子。经 PCR 鉴带的即为杂合子 reeler 小鼠，单一 265bp 条带的即为野生elin +/+，reelin +/- 2 种基因型个体，用于后期实验。 Master Mix (Dye Plus)*125μl1.5μl2μl
图 2 WT、HRM 和纯合子 reeler 小鼠海马结构及 CCH 诱导的海马脑片 CA3 区γ 振荡。（A1-C1）40×倍显微镜下 WT、HRM 和纯合子 reeler 小鼠海马结构。（A2-C2）A1-C1 图中红色虚线方框的 400×倍显微镜观。（A3-C3）WT、HRM 及纯合子 reeler 小鼠海马脑片应用 CCH 诱导 γ 振荡，应用 CCH 前后，，在海马 CA3 区记录到的 1s 场电位原始曲线。Fig.2 The hippocampal structure of WT, HRM and homozygous reeler mice andthe γ oscillation in CA3 region of hippocampal slices induced by CCH. (A1-C1)Hippocampal formation of Wild Type, Heterozygous Reeler Mouse and homozygous reelermice under 40 × magnification. (A2-C2) A1-C1 400 × magnification of the red dashed boxin the figure. (A3-C3) Wild Type, Heterozygous Reeler Mouse and homozygous reelermouse hippocampal slices using CCH induced γ oscillation, the application of CCH in thehippocampus CA3 area recorded 1s field potential of the original curve.
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R749.3;R-332
本文编号：2689949
【图文】：
程序为: 94℃预变性 5 min; 94℃变性 30 s, 53℃退火 30 s（Re40 个循环; 72℃延伸 10 min.增产物直接进行琼脂糖电泳检测。尔基因分离规律和自由组合规律，第 2 代小鼠可能具有以下合子 reeler 小鼠，杂合子 reeler 小鼠。由于 Reelin 纯合子有 鉴定，因此只需鉴定 Reelin 杂合子和野型纯合子。经 PCR 鉴带的即为杂合子 reeler 小鼠，单一 265bp 条带的即为野生elin +/+，reelin +/- 2 种基因型个体，用于后期实验。 Master Mix (Dye Plus)*125μl1.5μl2μl
图 2 WT、HRM 和纯合子 reeler 小鼠海马结构及 CCH 诱导的海马脑片 CA3 区γ 振荡。（A1-C1）40×倍显微镜下 WT、HRM 和纯合子 reeler 小鼠海马结构。（A2-C2）A1-C1 图中红色虚线方框的 400×倍显微镜观。（A3-C3）WT、HRM 及纯合子 reeler 小鼠海马脑片应用 CCH 诱导 γ 振荡，应用 CCH 前后，，在海马 CA3 区记录到的 1s 场电位原始曲线。Fig.2 The hippocampal structure of WT, HRM and homozygous reeler mice andthe γ oscillation in CA3 region of hippocampal slices induced by CCH. (A1-C1)Hippocampal formation of Wild Type, Heterozygous Reeler Mouse and homozygous reelermice under 40 × magnification. (A2-C2) A1-C1 400 × magnification of the red dashed boxin the figure. (A3-C3) Wild Type, Heterozygous Reeler Mouse and homozygous reelermouse hippocampal slices using CCH induced γ oscillation, the application of CCH in thehippocampus CA3 area recorded 1s field potential of the original curve.
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R749.3;R-332
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 邓锦波;王桂敏;赵善廷;范文娟;李明善;;Reeler小鼠海马齿状回形态结构与组织化学研究[J];解剖学报;2009年04期
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1 孙雪;新型多巴胺D3受体阻断剂Y-QA31抗精神分裂症药理学研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2015年
本文编号：2689949
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