Reelin缺失对小鼠小脑皮质和血管发育的影响

发布时间：2017-03-27 09:05

  本文关键词：Reelin缺失对小鼠小脑皮质和血管发育的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：血管的发生和细胞极性化的产生对于理解个体的发育、疾病的产生具有重要的意义。目前,实验领域主要研究的是研究小脑表观上面的发育,对于小脑的皮质生长过程中,由于Reelin蛋白缺失对血管发育的影响以及细胞极性化的产生所做的研究并不十分清楚。Reelin蛋白是在迁移细胞的过程中充当了终止信号的作用,这种蛋白对细胞片层化和细胞极性化以及血管的形成起着决定性的关键作用。我们用正常小鼠(WT)与Reeler小鼠的小脑分别进行尼氏染色,血管灌注和免疫细胞化学的方法进行实验研究,探讨Reelin蛋白的缺失对小脑皮质和血管发育的影响。目的观察Reelin基因缺失的Reeler小鼠小脑浦肯野细胞迁移与极性化的改变以及Reelin基因对小鼠血管生长的影响;探讨Reeler小鼠血管的发生和细胞之间的关系,同时分析这两种小鼠浦肯野细胞极性化的改变和血管发育方式的不同。方法本实验应用免疫细胞化学,尼氏染色技术和墨汁灌注技术标记两种不同小鼠从E17到P21小脑内神经细胞的发育情况,并进行形态学的观察,同时对Reeler与野生型小鼠小脑皮质内血管体密度和浦肯野细胞直径的大小和角度进行测量与比较。结果①Reeler小鼠小脑的皮质在发育过程中片层化发生了紊乱,没有形成正常的三层分层结构:外颗粒层(分子层),浦肯野细胞层,内颗粒层。②浦肯野细胞在迁移过程中细胞极性发生了改变,通过对小脑浦肯野细胞直径的大小和细胞角度改变的测量,发现不同的小鼠细胞极性发生了明显的不同,差异具有统计学意义P0.05③墨汁灌注的方法显示两种小鼠小脑内血管的体密度都呈现逐渐上升的趋势,根据发育过程中血管体密度变化的相关性分析可知:P3和P7时Reeler小鼠血管体密度与WT小鼠相比P0.05;P14和P21时,Reeler小鼠血管体密度与WT小鼠相比P0.01,显示出发育过程中血管的体密度与年龄有关,差异有显著统计学意义。另外观察不同小鼠血管的外观也有很大的差异。结论在小脑发育过程中缺少Reelin蛋白的Reeler小鼠皮质片层化发生紊乱,神经细胞极性发生改变,血管排列紊乱,体密度与相同年龄点的野生小鼠相比增大,Reelin蛋白在小脑皮质片层化发育生长的过程中发挥了至关重要的作用,一方面控制了皮层神经细胞形态结构的改变,并推进了哺乳动物生长发育的规律模式,形成了小脑发育的不同结构;Reelin也是一种支架蛋白,它的作用是调节放射状胶质细胞的形态学排列,为提供了细胞的正确迁移方向以及可以使血管能正常发育。提示Reelin蛋白的突变对细胞的发育造成了损伤,从而使皮质片层化发育和血管发生的紊乱以神经细胞极性的改变。
【关键词】：小脑 浦肯野细胞 Reelin蛋白 血管 细胞极性化
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R338
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 1 绪论10-16
• 1.1 Reelin及其受体的结构特点和生物学特性10-12
• 1.1.1 Reelin的功能10-12
• 1.1.2 Reelin蛋白的受体与信号传导12
• 1.2 Reelin蛋白和精神疾病的关系12-15
• 1.2.1 Reelin蛋白与自闭症12-13
• 1.2.2 Reelin蛋白与精神分裂症13
• 1.2.3 Reelin蛋白与阿尔兹海默13-14
• 1.2.4 Reelin蛋白与无脑回畸形14
• 1.2.5 Reelin蛋白与双相情感障碍14-15
• 1.2.6 Reelin蛋白与重度抑郁症15
• 1.3 目的及意义15-16
• 2 材料、仪器与方法16-24
• 2.1 动物的选择取材和切片16
• 2.1.1 PCR基因鉴定16
• 2.2 实验材料16-17
• 2.2.1 免疫组织化学试剂16-17
• 2.2.2 Nissl染色所用试剂17
• 2.3 实验试剂及配方17-19
• 2.4 实验主要仪器19-20
• 2.5 切片的制作20
• 2.5.1 石蜡切片20
• 2.5.2 震荡切片20
• 2.6 Nissl染色20-21
• 2.7 免疫组织化学荧光反应21
• 2.8 墨汁灌注法21
• 2.9 参数测量及统计学处理21-24
• 3 实验结果24-32
• 3.1 Reeler小鼠与神经细胞极性的改变24-26
• 3.2 Reeler小鼠与小脑血管发育26-28
• 3.3 Reeler小鼠与小脑浦肯野细胞极性化改变28-32
• 4 讨论32-36
• 4.1 Reelin蛋白可参与浦肯野细胞迁移的起始和终止32
• 4.2 Reelin蛋白的缺失可导致血管发育的紊乱32-33
• 4.3 Reelin蛋白可影响小脑浦肯野细胞的发育和极性变化33-36
• 5 结论36-38
• 参考文献38-42
• 附图42-46
• 图片说明46-52
• 附录52-56
• 附录A 缩略语表52-54
• 附录B 攻读学位期间发表学术论文目录54-56
• 致谢56-58

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本文编号：270153