甲型副伤寒沙门菌hla-spaO融合基因构建及其表达产物免疫保护作用

发布时间：2017-03-27 11:00

  本文关键词：甲型副伤寒沙门菌hla-spaO融合基因构建及其表达产物免疫保护作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的构建甲型副伤寒沙门菌h1a-spaO融合基因及其原核表达系统,确定重组表达产物rH1a-SpaO免疫保护作用。 方法采用柔性肽序列连接引物PCR构建并扩增hla与spaO基因的融合基因h1a-spaO, T-A克隆后测序。采用常规基因工程方法构建h1a-spaO融合基因原核表达系统,SDS-PAGE检测rH1a-SpaO表达情况。采用Western Blot鉴定rH1a-SpaO抗原性和免疫反应性,微量肥达试验确定rH1a-SpaO抗血清凝集甲型副伤寒沙门菌的能力。采用小鼠感染模型了解rH1a-SpaO对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的保护作用并与等量单一重组表达蛋白H1a (rH1a)及SpaO (rSpaO)比较。 结果所构建的h1a-spaO融合基因与单一hla或spaO基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%。h1a-spaO融合基因原核表达系统能高效表达rH1a-SpaO。 rH1a-SpaO能与rHHla或rSpaO抗血清结合,rH1a-SpaO抗血清也能识别rHl1a和rSpaO并经H抗原凝集甲型副伤寒沙门菌。100ngrH1a-SpaO对甲型副伤寒沙门菌感染小鼠的免疫保护率(93.3%)明显高于等量rHla(60.0%)及rSpaO (53.3%)(p0.05)。 结论重组融合蛋白抗原rHla-SpaO免疫保护作用较等量单一：rHla或rSpaO更强,可作为甲型副伤寒两价基因工程疫苗或伤寒／副伤寒荚膜多糖-蛋白结合疫苗的有效抗原。
【关键词】：甲型副伤寒沙门菌 h1a-spaO融合基因 重组表达 免疫原性 免疫保护性
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R378.22
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 1 引言10-12
• 2 rH1a-SpaO、rH1a、rSpaO原核表达载体构建、抗血清制备及免疫原性鉴定12-30
• 2.1 实验材料12-14
• 2.2 实验方法14-28
• 2.3 实验结果28-30
• 3 微量肥达试验30-32
• 3.1 实验材料30
• 3.2 实验方法30-31
• 3.3 实验结果31-32
• 4 小鼠免疫保护试验32-35
• 4.1 实验材料32
• 4.2 实验方法32-33
• 4.3 实验结果33-35
• 5 讨论35-37
• 6 结论37-38
• 参考文献38-41
• 综述41-49
• 参考文献46-49
• 作者简介及在读期间所取得的科研成果49

【参考文献】

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本文编号：270273