用于疫苗输送的功能化磷酸钙纳米载体的制备及研究

发布时间：2017-03-27 16:07

  本文关键词：用于疫苗输送的功能化磷酸钙纳米载体的制备及研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：疫苗在预防人类疾病方面有着重要的意义,疫苗佐剂的出现解决了某些疫苗低免疫原性的问题,并且为少剂量接种提供了可能,开发更为安全、有效、广谱的免疫佐剂,是扩大疫苗应用范围、研究新型疫苗的重要环节。本论文利用免疫活性多糖—甘露聚糖(mannan)为稳定剂制备了一种磷酸钙纳米载体,该纳米载体在实现疫苗传递的同时还可作为疫苗佐剂,用于增强免疫应答反应。作为抗原传递系统该载体为疫苗的新型佐剂研究提供了思路。该课题采用高碘酸钠(NaIO4)氧化甘露聚糖(mannan, MN)得多醛基氧化甘露聚糖,与帕米膦酸二钠(Pa)经还原胺化反应,获得带有磷酸根的甘露聚糖(Pa-MN),以此产物为稳定剂,依靠磷酸根与钙离子的静电吸附作用,通过共沉淀法制备了功能化磷酸钙(CAP)纳米粒。核磁共振、元素分析、与羟基磷灰石的结合、导电率测定等实验证明甘露聚糖-双磷酸盐复合物(Pa-MN)的成功合成,与伴刀豆球蛋白A(ConA)的特异性结合实验表明,合适的修饰度可保持甘露聚糖结构的完整性。通过动态光散射(DLS)粒度仪、扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)表征发现,该功能化纳米粒平均粒径为130.4±1.9nm,且分散性良好。BCA法和SDS-PAGE凝胶电泳用于测定抗原的装载量,结果表明该纳米粒对抗原的包封率为52.1%,细胞毒性实验结果显示制备的磷酸钙纳米粒具有良好的细胞相容性,在细胞吞噬实验中该纳米载体可提高细胞对抗原的摄取率,Elisa实验测定小鼠血清中OVA特异性抗体IgG, IgGl,IgG2a水平,结果显示该功能化纳米粒能显著提高抗OVA抗体水平,血清中IgG, IgGl,IgG2a水平比传统铝佐剂组抗体水平大于1.5倍,表明该载体具有作为免疫佐剂的良好潜力。
【关键词】：甘露聚糖 磷酸钙纳米载体 疫苗佐剂
【学位授予单位】：西南交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-12
• 第1章 绪论12-25
• 1.1 纳米药物载体13-17
• 1.1.1 纳米药物载体的概述13-14
• 1.1.2 磷酸钙纳米载体概述14
• 1.1.3 磷酸钙的分类14-15
• 1.1.4 磷酸钙的制备方法15
• 1.1.5 磷酸钙纳米粒的应用15-17
• 1.2. 多糖17-20
• 1.2.1 多糖的概述17
• 1.2.2 多糖的结构修饰17-19
• 1.2.3 多糖的应用19-20
• 1.3. 疫苗及其佐剂20-23
• 1.3.1 疫苗20-21
• 1.3.2 抗原呈递细胞在免疫反应中的作用21
• 1.3.3 免疫佐剂21
• 1.3.4 佐剂的分类21-23
• 1.4 研究意义及创新点23-25
• 1.4.1 研究意义23-24
• 1.4.2 创新点24-25
• 第2章 纳米粒的制备25-39
• 2.1 实验试剂25
• 2.2 实验仪器25-26
• 2.3 实验内容26-30
• 2.3.1 甘露聚糖(mannan)的结构修饰(Pa-MN的合成)26-28
• 2.3.1.1 实验原理26
• 2.3.1.2 实验方法26-28
• 2.3.2 Pa-MN的结构鉴定(与羟基磷灰石结合实验)28
• 2.3.3 Pa-MN结构完整性鉴定28-29
• 2.3.4 功能化磷酸钙纳米粒(Pa-MN CAP nanoparticles)的制备29-30
• 2.3.5 纳米粒的表征30
• 2.4 结果与讨论30-38
• 2.4.1 氧化甘露聚糖中醛含量30-31
• 2.4.2 Pa-MN中Pa的取代度31
• 2.4.3 Pa-MN的结构鉴定31-32
• 2.4.4 结构完整性分析32-33
• 2.4.5 Pa-MN的定性鉴别33-34
• 2.4.6 不同组份浓度对磷酸钙纳米载体性能的影响34-37
• 2.4.7 纳米粒的表征37-38
• 2.5 本章小结38-39
• 第3章 抗原的加载及小鼠免疫39-51
• 3.1 实验试剂39
• 3.2 实验仪器39-40
• 3.3 实验方法40-44
• 3.3.1 抗原的加载40
• 3.3.2 SDS-PAGE凝胶电泳40-41
• 3.3.3 细胞实验41-42
• 3.3.4 免疫实验42-44
• 3.4 结果与讨论44-49
• 3.4.1 OVA包封率44
• 3.4.2 SDS-PAGE凝胶电泳44-45
• 3.4.3 细胞毒性实验45-46
• 3.4.4 细胞吸收实验46-47
• 3.4.5 OVA特异性抗体水平47-49
• 3.5 统计学分析49
• 3.6 本章小结49-51
• 结论51-52
• 致谢52-53
• 参考文献53-60
• 硕士期间发表的文章及研究成果60

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本文编号：270636