【摘要】：[目的]:比较木瓜蛋白酶注射及Hulth法建立滇南小耳猪骨关节炎的作用效果,为建立骨关节炎动物模型提供新的思路。[方法]:选取27头10-15kg的成年滇南小耳猪作为研究对象。27头猪被随机分为三组:手术组(9头)、化学组(9头)及空白组(9头)。手术组接受前后交叉韧带切断、内侧副韧带切断及内侧半月板切除。化学组则于第1天、第4天及第7天接受关节腔木瓜蛋白酶注射。空白组则常规饲养。造模后4w、8w及12w每组分别处死3头猪,取滑膜ELISA检测SDF-I含量;取股骨内髁负重面关节软骨行组织学染色(HE染色、番红固绿染色及免疫荧光染色);取软骨行Q-PCR检测二型胶原蛋白、聚集蛋白聚糖及MMP-3mRNA含量、Westerm Blot检测二型胶原蛋白、聚集蛋白聚糖及MMP-3蛋白含量。[结果]:组织学染色:(1)HE染色及番红固绿染色显示4周时手术组出现软骨表面轻度损坏,8周时软骨破坏加重,潮线不连续,12周时大量软骨细胞丢失,细胞核排列紊乱,潮线消失。化学组4周是软骨表面粗糙,8周时软骨表面破坏并延伸至软骨下骨,12周时软骨破坏更加严重,且软骨下骨外露。(2)免疫荧光染色:显示手术组及化学组二型胶原蛋白含量逐渐减少,结合IOD/area结果显示化学组二型胶原蛋白降低更加明显,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)ELSIA:随着时间增加,手术组及化学组SDF-1含量较空白组显著增加,且同一时间内,化学组SDF-1含量更高,差异具有统计学意义(P0.05)。(4)QPCR:随着时间增加,手术组及化学组MMP-3 mRNA含量逐渐增加,而二型胶原蛋白及聚集蛋白聚糖mRNA含量逐渐下降,且同一时间内,化学组MMP-3下降,二型胶原蛋白及聚集蛋白聚糖增加更显著,差异具有统计学意义(P0.05)。(5)随着时间增加,手术组及化学组MMP-3蛋白水平逐渐增加,而二型胶原蛋白及聚集蛋白聚糖蛋白水平逐渐下降,且同一时间内,化学组MMP-3下降,二型胶原蛋白及聚集蛋白聚糖增加更显著,差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]:(1)滇南小耳猪可用于OA模型研究,且较传统小动物更方便获取足够的病理组织;(2)Hulth手术方法及木瓜蛋白酶注射都可以诱导滇南小耳猪关节软骨退变,形成骨性关节炎;(3)化学法在相同时间内可较手术法诱导更加明显的关节炎,且造模时间更短,对动物创伤更小;(4)手术造模后OA多局限于膝关节内侧间室,接近于人类早期OA表现;而化学法造模诱导出膝关节全间室OA,更接近于人类中晚期OA表现。(5)SDF-1可作为滇南小耳猪OA的特征性的标志物,故SDF-1/CXCR4信号通路在滇南小耳猪OA的病理过程中可能起关键作用,为下一步研制高效靶向治疗药物奠定基础。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R684.3;R-332
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本文编号：2707083
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