慢病毒介导的SHP-1过表达抑制模型小鼠动脉粥样硬化

发布时间：2017-03-27 20:15

  本文关键词：慢病毒介导的SHP-1过表达抑制模型小鼠动脉粥样硬化，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景和目的:动脉粥样硬化(Atherosclerosis)是血管疾病中最常见、最重要、最基础的一种,其特点就是动脉管壁逐渐增厚变硬,进而失去弹性,最后管腔缩小;粥样硬化病变的形成是动脉对内膜损伤作出的炎症-纤维增生性反应的结果,包括局部脂类和复合糖类聚集、纤维组织增生、钙质沉积及炎症反应等形成斑块,最终继发斑块内出血、斑块破裂及局部血栓形成,进而引起一系列恶性事件,严重者甚至失去生命。动脉粥样硬化(AS)是以脂质代谢紊乱、血管内皮细胞受损、炎性细胞浸润、斑块破裂和血栓形成为特征的长期慢性病理过程。因此,动脉粥样硬化(AS)基因治疗的的发展可以从这四个方面寻找治疗的靶点。CD40是一种I型跨膜蛋白,研究表明CD40高表达于人体和动物模型的动脉粥样硬化斑块中,抑制CD40信号传导则可促进动脉粥样硬化斑块消退;SHP-1是CD40信号传递的重要调控蛋白,其过表达可阻碍CD40对下游p38 MAPK蛋白的活化以及炎症反应,含SH2结构域的酪氨酸磷酸酶-1(SH2-domain-containing protein-tyrosine phosphatase-1,SHP-1)是一种胞内蛋白酪氨酸磷酸酶,其N-末端包含有2个Src同源结构域,主要表达于造血细胞系如T细胞、B细胞、单核细胞和上皮细胞系中。本研究通过建立动脉粥样硬化模型小鼠,利用慢病毒载体体内转染动脉粥样硬化斑块,来研究含SH2结构域的酪氨酸磷酸酶-1(SHP-1)慢病毒载体在动脉粥样硬化模型小鼠中的作用,从而为预防和治疗动脉粥样硬化斑块提供靶标。材料和方法:将45只8周龄雄性Apo E基因敲除小鼠随机分为3组,即对照组、绿色荧光蛋白(GFP)转染组、SHP-1转染组。3组小鼠右侧颈总动脉植入套环并高脂喂养8周,随后分别转染GFP空载体和SHP-1慢病毒(SHP-1-LV)。分别于转染第1、2、6周检测硬化斑块荧光强度、小鼠体重、血清胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)水平变化,并利用q RT-PCR和Western blot检测右侧颈总动脉中SHP-1、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等基因的表达,最后制作切片染色观察斑块病理变化。结果:荧光显微镜下观察到慢病毒转染第1、2、6周后斑块具有明显荧光,且在第一周时荧光强度最高慢病毒转染对小鼠体重和血清胆固醇(Serum cholesterol)、甘油三脂(Triglyceride)水平无显著影响。SHP-1-LV转染显著上调右侧颈总动脉中SHP-1m RNA和蛋白的表达,同时抑制IL-6、TNF-α、MMP-2、MMP-9等表达水平。SHP-1-LV转染也降低右侧颈总动脉斑块面积比、脂质含量。结论:过表达酪氨酸磷酸酶-1(SHP-1)可有效促进小鼠动脉粥样硬化斑块消退,从而为预防和治疗动脉粥样硬化提供靶点。
【关键词】：含SH2结构域的酪氨酸磷酸酶-1 动脉粥样硬化 慢病毒 ApoE基因敲除小鼠
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5;R-332
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 引言10-13
• 材料与方法13-23
• 结果23-27
• 讨论27-33
• 结论33-34
• 参考文献34-38
• 综述 CD40信号传导通路与动脉粥样硬化的研究进展38-57
• 参考文献49-57
• 中英文缩略词对照表57-58
• 个人简历及在校期间发表的学术论文58-59
• 致谢59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 胥雪莲;何川;;炎症与动脉粥样硬化[J];心血管病学进展;2015年05期

  本文关键词：慢病毒介导的SHP-1过表达抑制模型小鼠动脉粥样硬化，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：271011