病毒蛋白NS3、K7及2C与宿主蛋白相互作用的研究
发布时间：2020-06-16 15:01
【摘要】：宿主蛋白参与病毒生命周期的多个阶段。研究病毒蛋白与宿主蛋白相互作用有助于了解病毒蛋白的生物学功能,为抗病毒治疗提供新的思路。本论文选取来自三种病毒的三个病毒蛋白,研究其与宿主蛋白,特别是宿主膜运输相关蛋白的相互作用,为进一步研究病毒宿主相互作用提供线索。丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是黄病毒科肝炎病毒属中的重要人类病原体,其慢性感染最终导致肝细胞癌,严重威胁人们的生命健康。HCV编码10个蛋白,其中具有蛋白酶活性的NS3蛋白是治疗HCV的DAA(direct-acting antiviral agents,DAA)药物的靶标之一。为加深了解它们的生物学功能,我们分析其候选相互作用蛋白,并且进行相关验证。我们发现NS3 N端1-180aa与NAP1L1相互作用。K7蛋白是痘病毒家族中非常保守的一个蛋白,之前研究表明K7在抑制天然免疫过程中具有重要作用。为进一步探索K7的生物学功能,我们通过GST pulldown联合质谱的方法鉴定其相互作用蛋白。候选蛋白中有多个蛋白参与细胞内物质运输。我们选择coatomer、retromer和CHEVI这三个膜运输复合物进行验证。通过GST pulldown和免疫共沉淀的方法证明,这三个膜运输复合物都与K7相互作用。K7蛋白C末端KK对其与coatomer结合非常重要,而C末端的L对于K7与retromer结合比较关键。肠道病毒71型(enterovirus A71,EV-A71)可引起手足口病、严重的神经系统并发症,具有较高的病死率和致残率。2C蛋白是其编码的具有ATPase、GTPase、AMP激酶和解旋酶活性的蛋白,其参与病毒复制,且能抑制NF-κB活化,也可作为抗病毒药物靶标。为寻找更多的2C相互作用蛋白,我们利用GST pulldown联合质谱的方法,筛选2C相互作用蛋白。结果显示,2C蛋白能与TRIM4、exportin2、及ARFGAP1相互作用。共聚焦荧光显微镜发现2C与TRIM4及exportin2在宿主细胞内存在共定位。进一步分析发现且2C的264-329aa与ARFGAP1的1-136aa相互作用。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R373
【图文】：
呈逐年上升趋势。逡逑ＨＣＶ基因包含一条长约９．６ｋ单股正链ＲＮＡ，只含有一个开放读码框（ｏｐｅｎ逡逑ｒｅａｄｉｎｇ邋ｆｒａｍｅ，邋０ＲＦ）。该基因编码一条多肽链，经剪切形成１０个蛋白。图１逡逑展示了邋ＨＣＶ十个蛋白的示意图。其中，结构蛋白有四个：ｃｏｒｅ、Ｅｌ、Ｅ２和ｐ７；逡逑非结构蛋白包含ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ和ＮＳ５Ｂ六个蛋白。结构蛋白是病逡逑毒结构的重要组成部分，参与病毒的入侵过程。而非结构蛋白则可通过结合一些逡逑宿主细胞成分，参与调节病毒的生命周期过程［２］。逡逑ＨＣＶ邋ｐｏｓｉｔｖｅ－ｓｔｒａｎｄ邋ｇｅｎｏｍｅ逡逑５邋ＵＴＲ逦Ｖｉ邋ｎ－Ｄ逡逑？邋Ｖ邋ｍｉ逦『逦Ｑ邋（）ｗｕｃ＾逡逑９0４0逦Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ逡逑＼＼％＞逦＾逦会邋Ｓ，逡逑ａ邋ｓｉ邋ｗ邋ｎ邋皿邋Ｊｌ邋Ｊｌ邋Ｌ逦ＺＪ逡逑—－＾－１邋１ｃ］ｅｉ［邋Ｅ２邋１｜ｎＳ２１逦ＮＳ３邋ＴｉｆｓＴ邋ａ邋Ｎｆ５邋Ｖ＂逡逑Ａｉｌ／；７邋Ａ邋ｉ邋＼邋＼邋＼逡逑ｃａｐｓｉｄ逦［／逦丨0ｎ逦ｓｅｒｉｎｅ－邋＼邋ＮＳ３－邋＼邋＼逦＼逡逑ｅｎｖｅｊ0ｐｅ邋ｃｈａｎｎｅｌ邋ｐｒｏｔｅａｓｅ邋＼邋ｃｏｆａｃｔｏｒ邋＼邋ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ邋＼逡逑ｃｙｓｔｅｉｎｅ－逦ＮＴＰａｓｅ／邋？逦ＲｄＲｐ逡逑ｐｒｏｔｅａｓｅ逦ｈｅｌｉｃａｓｅ逡逑ｉ邋ＳＰＰ邋%藉澹樱绣澹斟澹危樱玻冲澹穑颍镥澹辏荩澹危樱冲澹穑颍铮矗铃义贤迹保澹龋茫值鞍撞灰馔迹怼ｅ义希茫铮颍迨牵龋茫值囊驴堑鞍祝嗦耄保梗备霭被幔鞍状笮≡冢玻冲澹耄模幔诓煌义闲偷模龋茫种蟹浅１Ｊ亍＃茫铮颍宓鞍祝味诵蛄形行裕洌枚嗽蛭杷浴Ｆ渲麇义弦植荚谙赴手
本文编号：2716191
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R373
【图文】：
呈逐年上升趋势。逡逑ＨＣＶ基因包含一条长约９．６ｋ单股正链ＲＮＡ，只含有一个开放读码框（ｏｐｅｎ逡逑ｒｅａｄｉｎｇ邋ｆｒａｍｅ，邋０ＲＦ）。该基因编码一条多肽链，经剪切形成１０个蛋白。图１逡逑展示了邋ＨＣＶ十个蛋白的示意图。其中，结构蛋白有四个：ｃｏｒｅ、Ｅｌ、Ｅ２和ｐ７；逡逑非结构蛋白包含ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ和ＮＳ５Ｂ六个蛋白。结构蛋白是病逡逑毒结构的重要组成部分，参与病毒的入侵过程。而非结构蛋白则可通过结合一些逡逑宿主细胞成分，参与调节病毒的生命周期过程［２］。逡逑ＨＣＶ邋ｐｏｓｉｔｖｅ－ｓｔｒａｎｄ邋ｇｅｎｏｍｅ逡逑５邋ＵＴＲ逦Ｖｉ邋ｎ－Ｄ逡逑？邋Ｖ邋ｍｉ逦『逦Ｑ邋（）ｗｕｃ＾逡逑９0４0逦Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ逡逑＼＼％＞逦＾逦会邋Ｓ，逡逑ａ邋ｓｉ邋ｗ邋ｎ邋皿邋Ｊｌ邋Ｊｌ邋Ｌ逦ＺＪ逡逑—－＾－１邋１ｃ］ｅｉ［邋Ｅ２邋１｜ｎＳ２１逦ＮＳ３邋ＴｉｆｓＴ邋ａ邋Ｎｆ５邋Ｖ＂逡逑Ａｉｌ／；７邋Ａ邋ｉ邋＼邋＼邋＼逡逑ｃａｐｓｉｄ逦［／逦丨0ｎ逦ｓｅｒｉｎｅ－邋＼邋ＮＳ３－邋＼邋＼逦＼逡逑ｅｎｖｅｊ0ｐｅ邋ｃｈａｎｎｅｌ邋ｐｒｏｔｅａｓｅ邋＼邋ｃｏｆａｃｔｏｒ邋＼邋ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ邋＼逡逑ｃｙｓｔｅｉｎｅ－逦ＮＴＰａｓｅ／邋？逦ＲｄＲｐ逡逑ｐｒｏｔｅａｓｅ逦ｈｅｌｉｃａｓｅ逡逑ｉ邋ＳＰＰ邋%藉澹樱绣澹斟澹危樱玻冲澹穑颍镥澹辏荩澹危樱冲澹穑颍铮矗铃义贤迹保澹龋茫值鞍撞灰馔迹怼ｅ义希茫铮颍迨牵龋茫值囊驴堑鞍祝嗦耄保梗备霭被幔鞍状笮≡冢玻冲澹耄模幔诓煌义闲偷模龋茫种蟹浅１Ｊ亍＃茫铮颍宓鞍祝味诵蛄形行裕洌枚嗽蛭杷浴Ｆ渲麇义弦植荚谙赴手
本文编号：2716191
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