Mipu1对巨噬细胞泡沫化的影响

发布时间：2017-03-28 18:18

  本文关键词：Mipu1对巨噬细胞泡沫化的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]分析Mipu1结构、功能以及研究过表达Mipu1对巨噬细胞泡沫化的影响。[方法与结果]通过生物信息学分析软件和网站对Mipu1的结构和功能进行生物信息学分析,结果发现Mipu1可能与氧化应激与脂质代谢相关,CD36启动子区含两个潜在Mipu1结合元件;采用荧光定量PCR和Western blot等方法,从整体动物水平和细胞水平探讨高胆固醇刺激时Mipu1和CD36的表达模式,结果发现ox LDL能诱导Mipu1和CD36表达,并成浓度和时间依赖性;采用高效液相色谱法、荧光标记法(Dil-ox LDL)和油红O染色探讨过表达Mipu1(转染Mipu1表达质粒)对ox LDL处理的巨噬细胞内胆固醇蓄积的影响,结果发现过表达Mipu1能够抑制巨噬细胞内胆固醇蓄积;采用荧光定量PCR和Western blot检测过表达Mipu1对ABCA1,ABCG1,SR-B1和CD36表达的影响,结果发现过表达Mipu1能明显抑制CD36表达而对ABCA1,ABCG1,SR-B1的表达影响不具有统计学差异。[结论]Mipu1能够抑制ox LDL诱导的巨噬细胞泡沫化,其作用机制可能与其调控CD36的表达有关。
【关键词】：心肌缺血预适应上调蛋白1 CD36 RAW264.7细胞 氧化低密度脂蛋白
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 第1章 绪论11-13
• 第2章 实验材料13-17
• 2.1 主要试剂和耗材13-14
• 2.2 主要仪器设备14
• 2.3 细胞株14-15
• 2.4 数据处理和分析15-17
• 第3章 实验方法17-27
• 3.1 生物信息学分析17
• 3.2 常用液体的配制17
• 3.3 动物模型制备17-18
• 3.4 血脂水平的检测18
• 3.5 油红O染色18
• 3.6 动脉粥样硬化损害分析18
• 3.7 细胞培养18-19
• 3.7.1 细胞复苏18
• 3.7.2 细胞传代18-19
• 3.7.3 细胞冻存19
• 3.8 Mipu1表达质粒和干扰质粒的转化和扩增19-20
• 3.8.1 溶液的配制19-20
• 3.8.2 受体菌的培养20
• 3.8.3 感受态细胞的制备(CaCl_2法)20
• 3.8.4 质粒的转化20
• 3.9 质粒的提取20-21
• 3.10 Western Blot检测21-25
• 3.10.1 蛋白质提取21-22
• 3.10.2 BCA蛋白定量22-23
• 3.10.3 Western Blot23-25
• 3.11 脂质聚积的检测25
• 3.12 实验分组25-27
• 第4章 实验结果27-45
• 4.1 Mipu1的生物信息学分析27-33
• 4.1.1 核酸序列分析27-29
• 4.1.2 Mipu1的氨基酸序列29-30
• 4.1.3 Mipu1二级结构30-31
• 4.1.4 Mipu1三级结构31
• 4.1.5 Mipu1功能预测31-32
• 4.1.6 启动子区含Mipu1结合位点的清道夫受体32
• 4.1.7 改变Mipu1表达水平对清道夫受体mRNA表达的影响32-33
• 4.2 Mipu1在AS新西兰兔主动脉中的表达情况33-36
• 4.2.1 高脂喂养对新西兰兔血脂水平的影响33-34
• 4.2.2 高脂喂养促使新西兰兔主动脉AS斑块的形成34
• 4.2.3 高脂喂养对新西兰兔主动脉Mipu1和CD36表达的影响34-36
• 4.3 oxLDL处理RAW264.7 细胞对Mipu1和CD36表达的影响36-39
• 4.3.1 不同浓度oxLDL处理RAW264.7细胞后Mipu1和CD36的表达36-37
• 4.3.2 75mg/L oxLDL处理RAW264.7细胞不同时间后Mipu1和CD36的表达37-39
• 4.4 Mipu1过表达抑制oxLDL诱导的巨噬细胞脂质聚积39-41
• 4.4.1 转染Mipu1对RAW264.7细胞Mipu1表达的影响39
• 4.4.2 过表达Mipu1对RAW264.7细胞内胆固醇含量的影响39-40
• 4.4.3 过表达Mipu1对RAW264.7细胞脂质摄取的影40
• 4.4.4 油红O染色观察过表达Mipu1对RAW264.7 细胞内脂滴的影响40-41
• 4.5 Mipu1过表达对oxLDL处理的巨噬细胞ABCA1，ABCG1，SR-B1及CD36表达的影响41-45
• 4.5.1 过表达Mipu1对RAW264.7细胞ABCA1 mRNA表达的影响41-42
• 4.5.2 过表达Mipu1对RAW264.7细胞ABCG1 mRNA表达的影响42
• 4.5.3 过表达Mipu1对RAW264.7细胞SR-B1 mRNA表达的影响42-43
• 4.5.4 过表达Mipu1对RAW264.7细胞CD36表达的影响43-45
• 第5章 讨论45-47
• 第6章 结论47-49
• 参考文献49-52
• 综述52-65
• 参考文献60-65
• 攻读学位期间的科研成果65-67
• 致谢67-69
• 附录69

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