β-胡萝卜素对脂多糖刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制

发布时间：2020-07-04 16:42

【摘要】：目的:探讨β-胡萝卜素对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制。方法:采用5μg/ml的LPS刺激巨噬细胞24 h后用不同浓度的β-胡萝卜素(20、40、80、160μmol/L)处理细胞3 h,MTT法测细胞活性,荧光定量PCR测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA相对表达量,ELISA测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌量,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量。5μg/ml的LPS和不同浓度的NF-κB抑制剂PDTC(1、5、10μg/ml)共同处理巨噬细胞24 h,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量,荧光定量PCR、ELISA测炎症因子的表达和分泌。比较LPS+PDTC组和LPS+PDTC+β-胡萝卜素组炎症因子和NF-κB p65蛋白相对表达的变化。结果:与LPS组相比,不同浓度的β-胡萝卜素对LPS刺激的巨噬细胞的细胞活性有提升作用,对炎症因子和NF-κB p65蛋白的表达有抑制作用;抑制NF-κB蛋白的表达可以抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子的分泌;LPS+PDTC+β-胡萝卜素组对炎症因子的抑制作用比LPS+PDTC组明显,且差异显著(P0.05),但两组对NF-κB p65蛋白的表达不明显。结论:β-胡萝卜素可以通过抑制NF-κB通路中NF-κB p65蛋白的表达抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌,且此通路不是唯一相关的通路。
【图文】：

至PVDF膜上，用3%的BSA封闭3h，一抗为鼠源的NF-κBp65抗体(1∶1000)，兔源的β-actin抗体(1∶5000)，4℃孵育过夜。1×TBST洗膜后分别加入相应的二抗:HＲP标记的山羊抗鼠IgG(1∶2000)和HＲP标记的山羊抗兔IgG(1∶3000)，37℃孵育1h。1×TBST洗膜后，感光，ECL显色，用密度比值表示目的蛋白量。1.3统计学方法应用SPSS17.0软件进行统计学分析，数据用x±s形式表示，并采用单因素方差分析数据，P＜0.05表示差异具有统计学意义，P＜0.01表示差异具有显著统计学意义。2结果2.1β-胡萝卜素对ＲAW264.7细胞活性的影响如图1所示，β-胡萝卜素作用ＲAW264.7细胞3h，可以提升细胞活性，且在浓度为20、40、80μmol/L时，差异极显著(P＜0.01);β-胡萝卜素作用ＲAW264.7细胞6h，浓度为160μmol/L时，极显著降低细胞活性(P＜0.01);β-胡萝卜素作用ＲAW264.7细胞12h，浓度为80、160μmol/L时，极显著降低细胞活性(P＜0.01)，所以，选取不同浓图1不同浓度的β-胡萝卜素作用不同的时间对ＲAW264.7细胞活性的影响Fig．1Differentconcentrationanddifferenttimeofβ-car-oteneoncellviabilityofＲAW264.7cellsNote:Comparedwiththecontrolgroup(0μmol/L)，*.P＜0.05，＊＊.P＜0.01.度的β-胡萝卜素作用细胞3h作为本试验的作用时间，在此浓度和时间范围内，β-胡萝卜素对细胞无明显毒性，可作为试验用安全浓度范围。LPS可以激活巨噬细胞，如图2所示，5μg/ml的LPS刺激ＲAW264.7细胞24h，细胞活性略有上升，继续用不同浓度的β-胡萝卜素处理细胞3h，细胞活性随着β-胡萝卜素浓度的升高而升高，有剂量依赖效应。由图2可知，β-胡萝卜素对LPS刺激后的巨噬细胞有增殖作用，基于细胞活性方面，此细胞模型建模成功，对细胞没有毒性。2.2β-胡?

?.01);β-胡萝卜素作用ＲAW264.7细胞12h，浓度为80、160μmol/L时，极显著降低细胞活性(P＜0.01)，所以，选取不同浓图1不同浓度的β-胡萝卜素作用不同的时间对ＲAW264.7细胞活性的影响Fig．1Differentconcentrationanddifferenttimeofβ-car-oteneoncellviabilityofＲAW264.7cellsNote:Comparedwiththecontrolgroup(0μmol/L)，*.P＜0.05，＊＊.P＜0.01.度的β-胡萝卜素作用细胞3h作为本试验的作用时间，在此浓度和时间范围内，β-胡萝卜素对细胞无明显毒性，可作为试验用安全浓度范围。LPS可以激活巨噬细胞，如图2所示，5μg/ml的LPS刺激ＲAW264.7细胞24h，细胞活性略有上升，继续用不同浓度的β-胡萝卜素处理细胞3h，细胞活性随着β-胡萝卜素浓度的升高而升高，有剂量依赖效应。由图2可知，β-胡萝卜素对LPS刺激后的巨噬细胞有增殖作用，基于细胞活性方面，此细胞模型建模成功，对细胞没有毒性。2.2β-胡萝卜素对LPS刺激ＲAW264.7细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的影响LPS可激活巨噬细胞，诱导其分泌一系列的炎症因子，炎症因子的分泌是评价炎症严重程度的一个量化指标，如图3A所示，LPS诱导巨噬细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmＲNA的表达，用不同浓度的β-胡萝卜素处理细胞后，炎症因子mＲNA相对表达量降低，且差异极显著(P＜0.01);如图3B所示，LPS刺激巨噬细胞炎症因子的分泌，不同浓度的β-胡萝卜素可降低其分泌量，提示β-胡萝卜素对炎症因子的表达和分泌有一定的抑制作用。2.3β-胡萝卜素对LPS刺激ＲAW264.7细胞NF-κBp65蛋白表达的影响NF-κB通路是炎症通路中重要的通路之一，如图4所示，用不同浓度的β-胡萝卜素处理LPS刺激后的巨噬细胞，NF-κBp65蛋白表达量随β-胡萝卜素浓度的升高而降低，说明，β

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