GPS2的SUMO修饰及其相关功能的研究

发布时间：2020-07-05 08:59

【摘要】：G蛋白信号通路抑制因子(G-protein pathway suppressor2, GPS2)作为JNK (c-Jun N-terminal kinase)途径的抑制因子被发现以来,已经被证实参与了多种细胞进程。GPS2可以与多种转录因子如p53、乳头瘤病毒E2和调节因子X4的变异体3(Regulatory Factor X4variant transcript3, RFX4_3v)相互作用,调节目的基因的表达。 GPS2是辅抑制复合物SMRT (Silencing Mediator for Retinoid and Thyroid-hormone receptors)的组成部分,对SMRT功能的发挥起着不可或缺的作用。SMRT复合物介导了他莫昔芬(40HT)对雌激素受体(estrogen receptor a, ERa)的转录抑制,过表达GPS2能够增加SMRT的抑制作用,而SMRT和GPS2的敲除能够促进乳腺癌细胞MCF7的增殖,暗示了GPS2对乳腺癌的发生和发展过程中有重要作用。 SUMO (Small Ubiquition Related Modifier)修饰作为一种重要的翻译后修饰方式,能够调节蛋白质的定位、稳定性及活性,本文的研究重点是确定GPS2的SUMO修饰,并进一步研究SUMO修饰对GPS2功能的影响,内容包括： 1在COS-7细胞中外源转染GPS2和SUMO1,通过免疫印迹和免疫共沉淀实验确定了GPS2能够被SUMO修饰。 2对GPS2进行序列分析和定点突变技术,确定GPS2存在两个SUMO修饰位点,K45和K71,并且这两个位点突变之后,GPS2的抑制功能有所减弱,暗示SUMO修饰参与了GPS2介导的转录抑制。 3通过免疫荧光和核质分离实验,确定SUMO修饰能够影响GPS2的细胞定位,促进了GPS2在细胞核中定位。并通过半衰期实验,证明SUMO修饰能够延长GPS2的半衰期,是通过增加GPS2与β-转导素相似因子-1(transducin beta-like1, TBL1)的相互作用实现的。 4利用萤光素酶报告基因技术,确定SUMO修饰增加GPS2对ERa的转录抑制作用是由于SUMO修饰促进了GPS2与SMRT之间的相互作用而实现的,并且这种抑制作用并不依赖于配体的存在。除此之外,利用MTT实验证实,SUMO修饰介导了GPS2抑制HeLa细胞和MCF-7细胞增殖的功能。本研究主要证明了GPS2能够被SUMO1修饰,并且GPS2的SUMO修饰为GPS2在细胞核中定位,增加了GPS2的蛋白稳定性,增强了GPS2抑制ERa转录活性的功能,抑制了癌细胞的增殖,对癌症的发生提供了理论基础。
【学位授予单位】：大连理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

【参考文献】