柯萨奇A16灭活疫苗病毒候选株的优化及其生物学特点

发布时间：2017-03-29 11:13

  本文关键词：柯萨奇A16灭活疫苗病毒候选株的优化及其生物学特点，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：柯萨奇A16病毒(CA16)与肠道病毒71型病毒(EV71)均可以诱发手足口病,即一种在亚太地区广泛传播的流行性疾病。虽然在中国大陆,EV71灭活疫苗已经完成三期临床,并批注上市,但是CA16疫苗仍在研发当中。而我们实验小组正在研制一种以Vero细胞为基础的CA16灭活疫苗。我们从手足口病患者咽拭子中分离多株手足口病毒,经分子生物学方法鉴定为CA16病毒,通过免疫动物制备血清、中和抗体试验等方法筛选出一株具有较强的交叉保护能力。通过对病毒进行生物学特性的鉴定,我们发现CA16 CC024病毒株在Vero细胞中具有较高的滴度(107.5CCID50/m L),非常适合作为CA16疫苗的病毒候选株。一只候选疫苗生产过程的建立包括以下几点:选择合适的病毒收获时间;选择滤膜来对病毒进行过滤与浓缩;选择凝胶过滤色谱来进行下游的病毒纯化,以及选择病毒灭活的方式。通过以上的分析,我们发现CC-16,一个CC024病毒有限稀释的克隆株,具有较好的遗传稳定性,高滴度以及广谱的免疫原性等特点,可以成为CA16灭活疫苗最佳的病毒候选株。所以,我们的研究可以为以后CA16疫苗以及CA16-EV71二价疫苗提供重要的信息。
【关键词】：柯萨奇A16病毒 手足口病 疫苗候选株 灭活疫苗
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 第1章 绪论9-13
• 1.1 手足口病9-11
• 1.2 柯萨奇A16病毒11-12
• 1.2.1 柯萨奇A16病毒的基因结构11
• 1.2.2 柯萨奇A16病毒的研究进展11-12
• 1.3 手足口病疫苗研究进展12-13
• 1.3.1 基因工程亚单位疫苗12
• 1.3.2 减毒疫苗12
• 1.3.3 灭活疫苗12-13
• 第2章 材料与方法13-21
• 2.1 材料及试剂13-15
• 2.1.1 细胞和病毒13
• 2.1.2 试剂13-14
• 2.1.3 主要仪器14
• 2.1.4 引物合成和测序14-15
• 2.2 实验方法15-21
• 2.2.1 细胞复苏与培养15
• 2.2.2 分离病毒15-16
• 2.2.3 病毒感染与扩增16
• 2.2.4 病毒滴度测定16-17
• 2.2.5 实时定量PCR17
• 2.2.6 病毒基因组测序17
• 2.2.7 电镜观察17
• 2.2.8 蛋白质免疫印迹17-18
• 2.2.9 银染实验18
• 2.2.10 CA16病毒纯化与规模化生产初试18-19
• 2.2.11 免疫小鼠实验19
• 2.2.12 中和试验19-20
• 2.2.13 统计学分析20-21
• 第3章 结果21-30
• 3.1 CA16CC024疫苗病毒株的分离与鉴定21-22
• 3.2 CA16病毒在Vero细胞中的适应株22-23
• 3.3 CA16CC024病毒株生物学特性23-24
• 3.4 在Vero细胞中筛选CC16CC024单克隆病毒株并鉴定24-26
• 3.5 上游工艺的初步研究26-27
• 3.6 下游工艺的初步研究及鉴定27-28
• 3.7 CA16 CC-16灭活疫苗在小鼠体内诱导体液免疫28-30
• 第4章 讨论30-32
• 第5章 结论32-33
• 参考文献33-38
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果38-39
• 致谢39

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