结核杆菌ESAT-6和CFP-10对巨噬细胞NLRP3炎性小体形成的影响及相关机制研究

发布时间：2020-07-07 11:26

【摘要】：结核病(Tuberculosis,TB)是危害人类的细菌传染病之一,其致病菌是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB),MTB在由呼吸道进入肺部后,被肺泡细胞所吞噬,由宿主的第一道防线如巨噬细胞所识别,它可以通过抑制吞噬溶酶体的融合、干扰细胞信号转导、抑制ROS(Reactive Oxygen Species)和RNS(Reactive Nitrogen Species)毒性反应、抑制细胞自噬等抵抗宿主细胞的免疫杀伤。目前,利用卡介苗(BCG)预防结核病已经渐渐显示出很多弊端,因此,本研究以RAW264.7细胞为研究对象,通过研究结核杆菌蛋白ESAT-6和CFP-10在感染巨噬细胞时引发相应的炎症反应,以qRT-PCR方法初步研究相关炎症因子及细胞焦亡相关因子的表达水平变化情况,Western blot检测NLRP3炎性复合体各组分表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,测定凋亡相关酶活性,初步探索NLRP3炎性小体的活化机制,结果显示:成功转染pEGFP-ESAT-6、pEGFP-CFP-10载体,当载体与转染试剂的比为1:4时,转染后6h时更换为完全培养基,转染的效率最佳;ESAT-6和CFP-10感染巨噬细胞后,其炎症相关因子caspase-1、IL-1β、IL-18、TNF-α、IFN-γ的表达量均发生不同程度上调;NLRP3、ASC、IL-1β、caspase-1的表达量在蛋白水平上表达上调,证明产生NLRP3炎性小体;流式细胞术检测,ESAT-6和CFP-10感染巨噬细胞后,与对照组相比,凋亡率增高。同时,凋亡相关因子caspase-3、caspase-7、caspase-8和caspase-9表达量上调;ESAT-6和CFP-10感染巨噬细胞后,焦亡相关因子GSDMD、caspase-11表达量上调,细胞发生焦亡。因此,我们初步证实ESAT-6和CFP-10可以诱导巨噬细胞发生炎症反应,产生NLRP3炎性小体,同时促进巨噬细胞发生凋亡和焦亡。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392
【图文】：

图 1.1 GFP 组、ESAT-6 组和 CFP-10 组转染 12h 的巨噬细胞 RAW264.7 倒置荧光显微镜观察(20Fig.1.1 Examination of RAW264.7 cell transfected with GFP,ESAT-6 and CFP-10,for 12inversion fluoresceence microscope (200×)PH：明场；GFP：绿色荧光；Merge：明场和绿色荧光叠加H: Bright field; GFP: Green fluorescence; Merge: Bright field and Brightfield and fluorescence overlay

图 1.1 GFP 组、ESAT-6 组和 CFP-10 组转染 12h 的巨噬细胞 RAW264.7 倒置荧光显微镜观察(200×)Fig.1.1 Examination of RAW264.7 cell transfected with GFP,ESAT-6 and CFP-10,for 12h byinversion fluoresceence microscope (200×)PH：明场；GFP：绿色荧光；Merge：明场和绿色荧光叠加PH: Bright field; GFP: Green fluorescence; Merge: Bright field and Brightfield and Greefluorescence overlay

图 1.3 GFP 组、ESAT-6 组和 CFP-10 组转染 36h 的巨噬细胞 RAW264.7 倒置荧光显微镜观察(200Fig.1.3 Examination of RAW264.7 cell transfected with GFP,ESAT-6 and CFP-10,for 36hinversion fluoresceence microscope (200×)PH：明场；GFP：绿色荧光；Merge：明场和绿色荧光叠加H: Bright field; GFP: Green fluorescence; Merge: Bright field and Brightfield and Gfluorescence overlay

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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本文编号：2745060