纳米银抗腺病毒（ADV3）作用及机制研究

发布时间：2020-07-24 05:09

【摘要】：腺病毒(Adenovirus)是从手术切除的扁桃体组织中分离培养出的一种DNA病毒,常引起人上呼吸道、眼部上皮细胞和肠道感染。腺病毒易发生院内感染和大规模流行,尤其在儿童和军营中易发生,艾滋病患者、‘固体器官和造血干细胞移植者、骨髓接受者、免疫遗传缺陷患者等感染腺病毒的机率较大。腺病毒以其型别多、致病范围广而越来越受到关注,因此研发一种新的抗腺病毒药物势在必行。通过纳米技术研制而成的纳米银(Silver nanoparticles, Silver-nps),可以抵抗G+和G-细菌的感染,也可以对人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、猴痘病毒、单纯疱疹病毒1型、流感病毒产生抑制作用。但有关Silver-nps抗腺病毒(ADV3)作用及机制的研究尚未见报道。本文采用细胞培养方法,免疫荧光方法,观察Silver-nps对ADV3子代病毒体生成的抑制作用、对ADV3侵入细胞的阻断作用以及直接灭活作用；同时应用透射电镜技术,常规PCR和Real-Time PCR的方法,观察Silver-nps在体外对ADV3病毒体及其DNA是否有破坏作用。Silver-nps在Hela细胞上最大无毒浓度(TC0)为52.48μg/mL; ADV3在Hela细胞上的半数感染浓度(TCID50)为10-2.74/100μL;最大无毒剂量范围内,50μg/mL的Silver-nps和等体积100TCID50ADV3分别于杀病毒(先ADV3感染细胞后Silver-nps处理)、抗病毒(先Silver-nps处理细胞后ADV3感染)、直接灭活病毒(ADV3和Silver-nps体外作用2小时后感染细胞)三种不同给药方式作用Hela细胞,细胞存活率分别为(93.58±1.79)%、(90.50±1.99)%、(95.38±2.98)%,而100TCID50ADV3感染Hela细胞后,测得细胞存活率为(31.92±2.86)%,两者相比差异具有统计学意义(P0.01)；免疫荧光结果显示,与ADV3对照组形成的强特异性荧光相比,先ADV3后Silver-nps、先Silver-nps后ADV3、Silver-nps和ADV3体外作用2小时后感染Hela细胞三种方式特异性荧光都很少见；电镜结果显示,与ADV3对照组相比,Silver-nps可直接与病毒粒子作用,且Silver-nps对ADV3粒子的破坏程度呈时间依赖性。PCR结果显示,与病毒对照组和溶剂对照组相比,Silver-nps作用后所扩增的目的条带的灰度值都相对较低。Real-Time PCR亦表明,不同浓度Silver-nps作用后的ADV3DNA的拷贝数都有所降低,与溶剂对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。说明Silver-nps对ADV3具有抑制作用,作用机制可能与Silver-nps破坏病毒粒子及其表面衣壳蛋白和腺病毒的DNA及其复制、转录过程中的酶有关。上述结果表明,Silver-nps在细胞水平和分子水平上对腺病毒均有抑制作用,本研究为研制Silver-nps作为新的抗病毒药物提供了实验基础和理论依据。
【学位授予单位】：大连大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R373

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本文编号：2768366