Caspase-1介导糖原合酶激酶-3β促进D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导的小鼠急性肝衰竭肝损伤

发布时间：2017-03-30 18:00

  本文关键词：Caspase-1介导糖原合酶激酶-3β促进D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导的小鼠急性肝衰竭肝损伤，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:以D-氨基半乳糖(D-GalN)和脂多糖(LPS)建立小鼠急性肝衰竭模型,研究caspase-1(半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1)在急性肝衰竭(ALF)动物模型中的作用及其可能机制。方法:以C57BL/6雄性小鼠为研究对象,将实验分为两部分:第一部分小鼠按随机数字表分为正常对照组、ALF模型组(ALF2h组、ALF4h组、ALF6h组),每组10只;第二部分小鼠按随机数字表分为正常对照组、Z-WEHD-FMK(氟甲基酮,caspase-1特异性抑制剂)单独处理组、ALF模型组、Z-WEHD-FMK干预组(Z-WEHD-FMK溶于二甲基亚砜),每组10只。第一部分实验将溶于生理盐水的D-GalN联合LPS(二者终浓度分别为450mg/kg和10μg/kg)以腹腔注射的方式注入小鼠体内,构建小鼠ALF动物模型,分别在D-GalN/LPS注射后2h、4h、6h麻醉(4%水合氯醛)小鼠取外周血,然后获取肝组织迅速提取蛋白;第二部分实验将Z-WEHD-FMK(3mg/kg)于造模前2h通过尾静脉注射入小鼠体内,D-GalN/LPS注射6h后即刻麻醉小鼠取外周血(下腔静脉血),然后获取肝脏组织(肝右叶)迅速提取蛋白和总RNA。血清转氨酶活性测定、组织病理学分析观察肝脏组织损伤情况;Western blot检测肝脏组织中caspase-1以及GSK-3β(糖原合酶激酶-3β)磷酸化的表达;实时定量PCR检测细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-33 mRNA的表达。结果:Caspase-1 mRNA和蛋白水平在ALF发生发展中表达升高。给予Z-WEHD-FMK抑制caspase-1活性后,可改善肝脏结构功能进而减轻肝损伤:Z-WEHD-FMK干预组与ALF模型组相比,前者肉眼观肝脏出血、淤血较轻,光学显微镜下可见肝小叶结构基本完整,仅个别肝细胞可见气球样变,小叶内及汇管区中性粒细胞、淋巴细胞等浸润不明显,血清ALT、AST水平较低[ALT:Z-WEHD-FMK干预组(479.2±39.5)U/L,ALF组(998.5±60.4)U/L,P0.05;AST:Z-WEHD-FMK干预组(478.5±28.6)U/L,ALF组(1180.7±91.4)U/L,P0.05];qRT-PCR结果显示Z-WEHD-FMK干预组细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-33的mRNA水平表达下调;Western blot结果显示Z-WEHD-FMK抑制caspase-1活性后,GSK-3β发生磷酸化而活性受抑制。结论:急性肝衰竭疾病进展过程中caspase-1的活化提高了GSK-3β活性,可能会促使炎症反应应答的发生发展并最终造成肝损伤。因此,以caspase-1为靶点进行干预,有望为临床上急性肝衰竭的治疗和预防提供新思路。
【关键词】：半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1 糖原合酶激酶-3β 肝功能衰竭 急性 炎症
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.3;R-332
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 1 材料与方法12-21
• 1.1 实验对象12
• 1.2 主要药品与试剂12
• 1.3 主要实验仪器12-13
• 1.4 主要溶液的配制13-15
• 1.5 实验方法15-21
• 2 实验结果21-23
• 3 文章附图23-28
• 4 讨论28-30
• 5 结论30-31
• 6 参考文献31-34
• 综述34-41
• 参考文献41-47
• 在学期间发表的学术论文与研究成果47-48
• 常用缩写词中英文对照表48-50
• 致谢50-51
• 个人简历51

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本文编号：277700