B7-H4受体的抗体10A10在肺腺癌研究中的应用

发布时间：2020-09-14 13:38

　　 B7-H4分子是B7家族的成员之一,其特异性表达在多种肿瘤组织中,如乳腺癌、肺癌、食管癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌等,并与疾病的不良预后有关。B7-H4分子通过与受体的结合发挥免疫负调控的作用,可以有效抑制T细胞的增殖、活化和细胞因子的产生来介导肿瘤的免疫逃逸。已有研究表明,利用B7-H4的抗体可以促进抗肿瘤免疫效应[1]。通过抑制B7-H4分子与B7-H4受体的结合,从而促进机体免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤。由此可见,B7-H4的受体在肿瘤免疫中的作用和地位,但由于B7-H4受体尚未克隆,关于其受体的研究较少,本课题组通过腹水诱生法用表达B7-H4受体的扁桃体细胞去免疫小鼠,从而得到了抗B7-H4受体的单克隆抗体10A10。本研究主要利用抗B7-H4受体的抗体10A10,通过其与B7-H4受体的特异性结合,研究B7-H4受体的表达与肺癌临床指征的关联性。主要通过检测肺癌细胞株和肺癌组织中B7-H4受体的表达来明确B7-H4受体在细胞和组织中的表达,另一方面,通过对肺癌组织芯片进行免疫组化研究,建立B7-H4受体表达与肺癌临床表现的关联,以期为肺癌的临床诊断与治疗提供一种方向。一、采用抗B7-H4受体的抗体10A10检测B7-H4受体在肺癌细胞株H1299和A549以及肺癌组织中的表达【目的】检测肺癌细胞株H1299和A549中B7-H4受体的表达;检测B7-H4受体在肺癌和癌旁组织中的表达,为下一步实验做准备。【方法】利用抗B7-H4受体的抗体10A10,通过流式细胞术检测B7-H4受体在肺癌细胞株H1299和A549中的表达情况。通过细胞爬片,利用细胞染色检测B7-H4受体在细胞中的表达和定位。利用免疫组化的方法,检测B7-H4受体在肺癌组织和癌旁组织的不同表达和其表达的定位。【结果】流式结果显示,B7-H4受体在肺癌细胞株H1299和A549中均有表达,且其在两种细胞中的表达有差异,B7-H4受体在A549中的表达略强于H1299,为57%,在H1299中的表达为40%。细胞染色结果显示,A549的染色强于H1299,与流式的检测结果一致。此外,通过细胞染色可以发现,B7-H4受体在H1299和A549中的表达主要定位在细胞核和细胞浆。肺癌和癌旁组织的免疫组化结果显示,B7-H4受体在组织中均有表达,主要定位在细胞核和细胞浆,且癌组织的着色明显强于癌旁组织。【结论】B7-H4受体在肺癌细胞株H1299和A549以及肺癌组织中均有表达,且主要表达在细胞核和细胞浆中。二、采用抗B7-H4受体的抗体10A10检测B7-H4受体在肺腺癌组织芯片中的表达并分析其与临床指标的关联性【目的】检测B7-H4受体在肺癌和癌旁组织中的表达并分析其与肺癌病人临床病理参数的关联性。【方法】购买肺腺癌病人的150点组织芯片。其中,肺癌组织为75点,癌旁组织为75点,且为一一对应。通过免疫组化的方法,检测肺腺癌芯片组织中B7-H4受体的表达水平,并根据组织着色的阳性率和染色强度对其进行评分,利用SPSS软件分析染色评分与病人病理参数的关联性。【结果】免疫组化结果显示,B7-H4受体主要表达在肺腺癌样本的细胞浆和细胞核,其在肺腺癌癌组织和癌旁组织的表达有差异,且癌组织胞浆的表达强于癌旁组织胞浆的表达;癌组织胞核的染色也强于癌旁组织。关联性分析显示,B7-H4受体在癌组织与癌旁组织胞浆的表达具有相关性,且为正相关;B7-H4受体在癌组织胞核的表达和癌旁组织胞核的表达呈现正相关;此外,B7-H4受体在癌组织胞核的表达和患者性别、临床分期相关;癌旁组织胞核的表达和患者性别相关。生存分析显示,在单因素分析中,B7-H4受体在癌组织和癌旁组织的表达都与病人的预后相关。另外,肿瘤大小、T分期、N分期、临床分期也分别和病人的预后显著相关。多因素分析中,B7-H4受体在癌组织胞核中的表达和肿瘤大小可以作为病人独立的预后因素。【结论】B7-H4受体在肺腺癌中的表达和病人的预后相关,并且其在病人组织胞核中的表达和肿瘤大小可作为独立的预后因素之一。
【学位单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R392
【部分图文】：

肿瘤免疫,机制,免疫逃逸

培养 48h 后，CD25Foxp3T 细胞在 CD4T 细胞中的比例升高[24]，这4 可促进调节性 T 细胞的增殖。在肿瘤微环境中，肿瘤组织中高表达的 B7-H4 分子导致 CD3+和 CD8+的淋巴细胞(TAL)数目显著减少[25]，高表达 B7-H4 的肿瘤相关巨噬细胞(T瘤微环境中也可以显著地阻抑 CD8+T 细胞的活化和增殖功能[26]，从而细胞在机体中转移和生长[27]。当运用 siRNA 干扰技术沉默 TAM 上达后，对 CTL 的这种抑制效应不再显现。在肿瘤微环境内，B7-H4 能通过在不同细胞成分的选择性表达从而抑制性 T 细胞的活化和增殖。B7-H4 的其他作用还包括阻滞细胞毒性 T 淋巴)细胞周期进展和减少细胞因子的产生。B7-H4 通过以上途径负性调节 T疫应答。B7-H4 分子异常表达可使机体对肿瘤的免疫监视作用减弱，从瘤免疫逃逸。此外，有研究发现 B7-H4 还可通过抑制中性粒细胞的前体从而抑制固有免疫应答，进一步促进肿瘤细胞免疫逃逸的发生。

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