microRNA-24对大鼠血管eNOS及血浆NO的影响及其机制研究

发布时间：2020-09-21 11:10

　　 目的:本研究将通过体内模拟转染环境构建转染大鼠模型,从体内探究microRNA-24对成年雄性大鼠血管组织形态学、血管内皮细胞eNOS表达、活性、eNOSmRNA表达及血浆NO的影响,从而探究microRNA-24参与雄性大鼠血管内皮细胞调节的作用机理及高血压发生过程相关机制。方法:1、构建microRNA-24高表达质粒,构建体内转染大鼠模型:选取6-8周龄SD(SPF级)健康雄性大鼠和自发性高血压大鼠(SHR),参照前人的研究方法体内模拟转染环境,通过瞬时转染技术,分别给予大鼠尾静脉注射microRNA-24高表达质粒和空白质粒,留取血管组织切片,荧光显微镜下观察各质粒在体内的表达情况,验证转染大鼠模型的成功构建。2、实验验证:(1)检测大鼠血管组织的绿色荧光;(2)使用HE染色观察转染后大鼠血管组织形态变化;(3)使用免疫组织化学方法观察转染后大鼠血管组织eNOS蛋白的变化;(4)ELISA法检测转染大鼠血浆eNOS活性;(5)硝酸还原法检测大鼠血浆中代谢物NO的含量;(6)RT-PCR分析大鼠血管组织eNOS mRNA表达。结果:1、健康成年雄性大鼠经过尾静脉注射microRNA-24高表达质粒和空白质粒后,两组的大鼠血管组织均可检测到绿色荧光。结果表明质粒被引入到大鼠动脉组织中并且成功构建了转染的大鼠模型;2、空白质粒SD组血管组织各层结构紧密,内膜光滑,中膜弹性纤维正常,与空白质粒SD组相比,microRNA-24SD组、SHR组大鼠的血管组织未见明显改变;3、给予microRNA-24质粒注射后的正常大鼠血管组织eNOS蛋白表达量明显低于空白质粒组,水平接近于SHR组;4、经过microRNA-24质粒注射处理后,大鼠血浆eNOS活性相对于空白质粒组明显下降(P0.05),水平接近于SHR组;5、给予microRNA-24质粒注射的血浆代谢产物NO合成与释放量明显低于空白质粒组(P0.01),水平接近于SHR组;5、给予microRNA-24质粒注射的eNOS mRNA表达显著低于空质粒组(P0.05),降低程度接近SHR组,差别有统计学意义。结论:1、该实验成功地建立了体内转染大鼠模型,可为今后的研究和其他疾病研究提供充分的理论和试验基础;2、大鼠血管组织eNOS的表达、活性受到microRNA-24水平上升的抑制;3、microRNA-24的过表达抑制血浆代谢物NO的合成和释放;4、microRNA-24过表达可抑制大鼠血管组织eNOSmRNA的表达;5、microRNA-24可能通过抑制eNOS的表达、酶活性及其代谢产物NO的合成释放影响血管组织状态、血压平衡从而致使高血压等心血管疾病的产生和发展;6、microRNA-24有望为制备分子药物和预防、治疗高血压及其他疾病提供基础。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R-332
【部分图文】：

取大鼠血管组织进行冰冻切片，显微镜下观察各组的荧光表达，具体情况详见图3-1。结果显示，各组的大鼠血管组织皆可检测到绿色荧光。结果提示，质粒已转入大鼠动脉血管组织。cd图 3-1 大鼠动脉血管组织的绿色荧光表达（400×）

图 3-2 大鼠血清 NO 的含量(**P<0.01 与空白质粒 SD 组比较， x s ,n 5）Figure 3-2 The levels of serum NO in rats(**P<0.01 compared with blank plasmid SD group, x s ,n 5)3、大鼠血管组织形态学 HE 染色为了探讨 microRNA-24 对血管组织的影响，我们对大鼠动脉血管组织进行HE染色分析，以此来观察实验大鼠血管内皮形态改变（如图 3-3）。结果发现，空白质粒 SD 组血管组织各层结构紧密，内膜光滑，中膜弹力纤维正常。与空白质粒 SD 组相比，microRNA-24SD组大鼠的血管组织形态学改变并不明显；SHR 组血管内皮常见局部

图 3-3 大鼠血管组织 HE 染色（400×）（a）microRNA-24SD 组；（b）空白质粒 SD 组；（c）microRNA-24SHR 组；（d）空白质粒 SHR 组Figure 3-3 The H＆E staining of rat vascular tissue（400×）(a) microRNA-24SD group; (b) blank plasmid SD group; (c) microRNA-24SHR group; (d)blank plasmid SHR group4、大鼠血管组织 eNOS 蛋白的半定量表达分析为了研究 microRNA-24 对大鼠产生影响时 eNOS 的表达模式，

【参考文献】

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本文编号：2823412