rh-EGF和rh-SOD1对兔子皮肤创伤的愈合作用及辅料对其的抑制作用

发布时间：2020-09-23 11:29

　　随着生命科学和生物技术的发展,许多人源的生物活性因子被应用于皮肤护理与美容行业,例如表皮细胞生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)等。护肤品中功能因子的生物活性是其有效性的关键,然而配方中含有种类多样的辅料,部分辅料可能对功能因子的生物活性有影响。如何在护肤品配方研制过程中筛选合适的辅料及添加比例是本论文研究的重点。本研究将护肤品中常用的25种辅料,根据推荐的添加比例设置高、中、低三个浓度梯度,采用邻苯三酚法检测辅料对rh-SOD1生物活性的影响,筛选对rh-SOD1生物活性有影响的辅料;同时以Balb/3T3细胞为细胞模型,采用MTT法检测辅料对rh-EGF生物活性的影响,筛选对rh-EGF生物活性有影响的辅料;最后,基于rh-EGF对表皮创伤的促愈合作用,采用新西兰大耳兔,建立皮肤切割伤模型,进一步明确筛选出的辅料对rh-EGF生物活性的影响。主要结果如下:(1)邻苯三酚法试验结果显示,0.20%EDTA·2Na在7d之内对rh-SOD1生物活性无显著性影响;0.50%EDTA·2Na在第7d使rh-SOD1生物活性下降到66.53%;1.00%EDTA·2Na在第3d使其生物活性下降到60.09%,第7 d下降到34.52%。其他辅料对rh-SOD1生物活性均无显著性影响。EDTA作为常见的螯合剂,能够螯合rh-SOD1中的Cu2+及Zn2+致其失去生物活性。数据显示在保证EDTA·2Na功效的同时可降低其添加比例,以保持rh-SOD1的活性。(2)细胞模型试验结果显示,0.15%和0.40%的大分子透明质酸钠使rh-EGF活性下降到50.42%和45.26%;0.20%和0.40%的黄原胶使rh-EGF活性下降到38.45%和20.55%。其他辅料对rh-EGF生物活性均无显著性影响。在研制配方的过程中可降低大分子透明质酸钠的添加比例,将不同分子量的透明质酸钠复配使用可以发挥更好的功效;而黄原胶则可选择有相同功效的替代品。(3)动物试验结果显示,rh-EGF具有促进兔表皮切割伤愈合的作用,在本试验测试的rh-EGF浓度范围内(0.5-100μg/ml),比生理盐水组平均愈合时间提前了1~3 d;并且显示良好的剂量效应,随着剂量的升高,促愈合作用进一步增强;100μg/ml rh-EGF促创面愈合效果最为明显。同时,rh-EGF处理可以使其毛发再生,也呈现良好的剂量效应,推测可能是由于促进瘢痕处毛囊干细胞的增值、分裂,加快瘢痕处新生毛囊的形成。0.40%黄原胶组和10μg/m L rh-EGF+0.40%黄原胶组的创面愈合时间都比生理盐水组晚1d,黄原胶能抑制rh-EGF的促皮肤切割伤愈合作用,与细胞试验结果一致。0.40%透明质酸钠组和10μg/m L rh-EGF+0.40%透明质酸钠组的创面愈合时间与生理盐水组相比提前了2 d,与10μg/m L rh-EGF组的愈合时间相同,与细胞试验结果并不一致。这可能与透明质酸特有的生理功能有关,其本身是细胞外基质的主要组成成份之一,具有促进伤口愈合的功能。
【学位单位】：浙江农林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R641;R-332
【部分图文】：

配位结构,SOD活性,亚基,活性中心

本研究使用的 SOD 为 Cu,Zn-SOD，1975 年得到其三维结构，发现它是由 2 个基本相似的亚基组成的二聚体，且每个亚基含有 1 个铜原子和 1 个锌原子。2 个亚基之间通过非共价的疏水相互作用缔合。每个亚基活性中心金属的配位结构如图1-1所示。图 1-1 天然 SOD 活性中心配位结构Figure1-1 The active center coordination structure of natural SOD

亚基,生理生化作用,理化性质,精氨酸

Zn-SOD 酶活性中心结构gure1-2 The Enzyme activity center structure of Cu,Zn-定 Cu,Zn-SOD 的活性中心，得出由两个亚基组的一个“疏水口袋”，如图 2 所示[32]。这一疏一带正电的精氨酸残基 Argue141，它不但能，还可以在催化反应中提供质子，加快催化反的理化性质子量约为 15000~17000 的两个亚基所组成，分紫外吸收峰在 250~270 nm 处，280 nm 处无u,Zn-SOD 在 680 nm 附近有明显吸收峰。Cu+与 Zn+具有不同的生理生化作用，Cu2+为 Cu+则 Cu,Zn-SOD 酶活性全部丧失，重新加

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