自噬在气管狭窄动物模型中的表达及意义

发布时间：2020-09-24 21:20

　　目的研究自噬在气管狭窄家兔模型中的表达及活化状态,初步探讨自噬在家兔气管狭窄发病过程的意义。方法18只雄性家兔根据随机数字表法均分成空白对照组(C)、生理盐水组(NS)、红霉素组(EM)3组,每组6只。按照文献方法建立家兔气管狭窄模型后,C组不予以任何处理,术前7 d至术后9 d期间,NS组予以生理盐水0.54 mg/kg雾化,EM组予以红霉素7.5 mg/kg喂食,均为2次/d。术后第10天处死家兔,收集气管标本。利用HE染色观测气管上皮层及固有层病理变化,测量气管上皮层及固有层厚度,应用Masson染色检测气管上皮层及固有层中胶原纤维面积比例,运用实时荧光定量PCR检测气管组织中转化生长因子β-1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)、Ⅲ型胶原蛋白(COL3A1)、自噬相关基因3(ATG3)、自噬相关基因5(ATG5)的mRNA相对表达量,运用免疫组化法检测TGF-β1、COL1A1、COL3A1纤维化因子蛋白的相对表达量,运用Western blot法检测微管相关蛋白1轻链β_3(LC3B)、ATG3、ATG5蛋白的表达水平。结果(1)气管上皮层(EPI)及固有层(LP)厚度检测:家兔气管狭窄模型中发现,NS组的上皮层及固有层厚度最大(1.49±0.28mm),显著高于C组(0.24±0.39mm),差异具有统计学意义(P0.05),予以红霉素干预后,气管上皮层及固有层厚度(0.47±0.08mm)明显较NS组减少,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)Masson染色:C组、NS组、EM组气管上皮层及固有层中胶原纤维面积积所占比例分别为(6.79±0.67)%、(40.55±5.40)%、(27.48±0.43)%,组间差异均有统计学意义(均P0.05)。(3)实时荧光定量PCR:各处理组TGF-β1、COL1A1、COL3A1、ATG3、ATG5因子mRNA相对表达量与气管的上皮层及固有层厚度密切相关。在NS组,TGF-β1、COL1A1、COL3A1因子mRNA的相对表达量均显著高于C组,而ATG3 mRNA和ATG5 mRNA的相对表达量均显著低于C组,差异均具有统计学意义(均P0.05)。予以红霉素干预后,TGF-β1、COL1A1、COL3A1因子mRNA的相对表达量均显著低于NS组,ATG3和ATG5mRNA的相对表达量均显著高于NS组,差异均具有统计学意义(均P0.05)。(4)免疫组化:在各组气管组织中可见TGF-β1、COL1A1、COL3A1蛋白在上皮层及固有层中均有表达,大部分表达在上皮层的上皮细胞及固有层的间质细胞的胞浆中。在NS组中,TGF-β1、COL1A1、COL3A1蛋白相对表达水平均显著高于C组(均P0.05),在EM组中TGF-β1、COL1A1、COL3A1蛋白相对表达水平均显著低于NS组(均P0.05)。(5)Western Blot:在NS组中,LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白比值、ATG3和ATG5蛋白表达水平均显著低于C组(均P0.01),红霉素干预后蛋白表达水平均显著高于NS组(均P0.01)。结论(1)在家兔气管黏膜受损后狭窄模型中,纤维化因子TGF-β1、COL1A1、COL3A1表达均显著升高,其可能参与了气管纤维化的发生发展过程。(2)家兔气管发生狭窄后自噬表达水平降低,红霉素可提高其表达水平,同时还可以减轻气管黏膜纤维化程度,可能是红霉素通过上调自噬表达水平来改善气管纤维化的过程。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R562.12;R-332
【部分图文】：

气管,低倍,固有层,气管上皮

自噬在气管狭窄动物模型中的表达及意义 2018届硕士学位论文Tracheal lumenII2-A 2-B 2-C1.2 家兔气管组织的镜下上皮层及固有层厚度1.2.1 镜下测量气管上皮层及固有层的具体测量方法如图2所示在高倍显微镜下将气管上皮层及固有层均分为5个相等部分I-V，依次测量从气管腔的上皮层至固有层的厚度。

厚度,气管上皮,固有层,生理盐水

± 0.08）mm 显著低于 NS 组，但仍显著高于 C 组意义（均 P＜0.05）。（表 2-1，图 3）表 2-1. 各组气管上皮层及固有层厚度（mm）Table 2-1. Thickness of EPI and LP in each group （mGroup Number meanC 6 0.24 NS 6 1.49aEM 6 0.47b注：a：与空白对照组比较(均 P＜0.05)b：与生理盐水组比较(均 P＜0.05)Note: a, vs C group (all, P < 0.05)b, vs NS group (all, P < 0.05)

高倍放大,胶原纤维,固有层,上皮层

自噬在气管狭窄动物模型中的表达及意义 2018届硕士学位论文1.3 Masson 染色结果在 C 组，在上皮层未见明显呈绿色的胶原纤维表达，在固有层中有少量胶原纤维表达，其中胶原纤维面积所占比例为（6.79±0.67）%。而在 NS组的上皮层及固有层中均有大量胶原纤维表达，胶原纤维面积所占比例为（40.55±5.40）%，EM 组上皮层及固有层中绿染面积明显较 NS 组减少，胶原纤维面积所占比例为 (27.48±0.43)%，组间差异均有统计学意义（均 P＜0.05）（图 4-A、B、C，图 5，表 2-2）。

【参考文献】