类精神分裂症小鼠视觉恐惧模型建立及TRPC3、TRPC6在脑的表达

发布时间：2020-09-25 08:37

　　目的:建立基于图形视觉的条件性恐惧实验范式,探究类精神分裂症小鼠在视觉恐惧建立和消退过程中僵直度的变化并考察瞬时感受器电位C离子通道3(transient receptor potential canonical channel,TRPC3)、TRPC6在脑内的表达变化。方法:将48只C57小鼠随机分为正常对照组、空白对照组、苯环利定(Phencyclidine,PCP)组、苯环利定+氯氮平(Clozapine,CLZ)组,每组12只,后二组小鼠皮下注射苯环利定建立类精神分裂症小鼠模型,其中苯环利定+氯氮平组给予氯氮平治疗,然后空白对照组、苯环利定+氯氮平组、苯环利定组小鼠在改装后superFcs型条件性恐惧实验系统进行视觉恐惧训练,并在随后的四天恐惧消退期内每日给予视觉刺激,记录僵直度变化;条件性恐惧三组及正常对照组小鼠行全脑切片用于免疫组化染色以检测TRPC3、TRPC6在脑的表达。结果:1.在恐惧训练期(Day1),苯环利定+氯氮平组的僵直度显著大于空白对照组和苯环利定组(P0.05),而苯环利定组僵直度大于空白对照组,差异无显著意义(P0.05),苯环利定+氯氮平组与苯环利定组相比无显著意义(P0.05)。三组实验小鼠的僵直度在测试期第1天(Day2)较训练期(Day1)均增大,尤其是苯环利定+氯氮平组和苯环利定组均显著增大(均P0.05);之后在测试期第2,3,4天(Day3-5)三组实验小鼠僵直度逐渐减小,苯环利定组与前一天比较均有显著性差异(均P0.05),苯环利定+氯氮平组在测试期第2、3与前一天比较均有显著性差异(均P0.05),而空白对照与前一天比较均无显著性差异(均P0.05)。2.免疫组化结果显示与正常对照组相比,苯环利定+氯氮平组、苯环利定组、空白对照组TRPC3阳性细胞面积百分比在海马CA2区明显减小,差异有统计学意义(P0.05)。在前额叶与苯环利定组相比苯环利定+氯氮平组明显减小,差异有统计学意义(P0.05);苯环利定+氯氮平组与空白对照组相比明显减小,差异有统计学意义(P0.05);小脑苯环利定组与正常对照组相比明显增大,差异有统计学意义(P0.05);在小脑中与苯环利定组相比,苯环利定+氯氮平组TRPC3阳性细胞面积百分比明显减小,差异有显著性(P0.05)。TRPC3在海马其余各区、顶叶无明显变化(P0.05)。TRPC6阳性细胞面积百分比在前额叶、小脑、海马分布和表达无明显变化(P0.05),与苯环利定+氯氮平组相比,苯环利定组和正常对照组TRPC6阳性细胞面积百分比在顶叶明显减小,差异有统计学意义(P0.05);在顶叶与正常对照组相比空白对照组TRPC6阳性细胞面积百分比明显增大,差异有统计学意义(P0.05)。结论:本研究成功建立了基于图形视觉的条件性恐惧实验范式。类精神分裂症小鼠易产生视觉条件性恐惧,消退较快;氯氮平治疗对恐惧消退的影响不显著。TRPC3、TRPC6在脑内不同区域分布和表达差异,提示可能参与类精神分裂症小鼠视觉恐惧活动过程。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R749.3;R-332
【部分图文】：

示意图,条件性,适应期,环境

旷场实验：参照文献报告方法[7]，记录苯环利定+氯氮平组、苯环利定组、空白对照组小鼠 5 分钟内由底面中心开始走动穿越的格子数，小鼠四肢走至同一格内计为其行走一格。1.3.2 基于图形视觉恐惧的条件性恐惧实验系统的建立（1）硬件组成：实验硬件组成分为二个单元：第一单元为条件性恐惧训练单元，采用上海欣软信息科技有限公司 superFcs 条件性恐惧实验系统（型号：XR-XC404）进行条件性恐惧实验，该实验装置由内箱和一个隔音外箱组成，顶部设置一红外摄像机，内箱底部由二部分构成，上层是导电不锈钢圆杆组成的电击板，用以提供足底电击；下层是用于承接小鼠粪便的粪盘。第二单元是视觉恐惧显示单元，在实验系统外箱后壁正中悬挂一块可以呈现恐惧视觉图像的 LED 显示器。为了便于小鼠识别，设定 LED 显示器上图像大小 400×400pixels，图形为黑底白字的圆环（图 1）[3]。LED显示器与视频分配器相接，并与计算机终端相连。

刻板行为,实验小鼠,自主活动

山西医科大学硕士学位论文2 结果为学实验结果三组实验动物的刻板行为与自主活动实验结果环利定组给药后，小鼠的反复摇头、转圈等刻板行为明显，与空白对照显著性（P<0.05）。环苯利定+氯氮平组给药后，则表现为刻板行为的对照组相比，差异无显著性（P>0.05）（图 2）。环苯利定组自主活动空白对照组相比，差异有显著性（P<0.01）。环苯利定+氯氮平组给药自主活动的减少，与空白对照相比，差异无显著性（P> 0.05）(图 3)。

实验小鼠,自主活动,刻板行为

差异无显著性（P>0.05）（图 2）。环苯利定组自主活白对照组相比，差异有显著性（P<0.01）。环苯利定+氯氮平组给主活动的减少，与空白对照相比，差异无显著性（P> 0.05）(图图 2 实验小鼠刻板行为（n=12）与空白对照组相比，差异有显著性，P < 0.05

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