改良破伤风类毒素疫苗培养基和制备方法对其生物学特性影响的初步研究

发布时间：2020-11-09 19:43

　　破伤风梭菌能够分泌破伤风外毒素,该外毒素经过甲醛灭毒,再经精制纯化之后即制成破伤风类毒素疫苗。该疫苗可接种人和动物,用以预防破伤风。但目前国内企业采用常规制备方法制备的破伤风类毒素疫苗存在纯化程度低、免疫原性弱和副作用高等缺点,严重限制了破伤风类毒素疫苗的应用,优化培养基和制备方法是解决这些问题的关键。因此,本研究着力于对破伤风精制类毒素的培养基和制备方法进行优化,希望能够改善疫苗目前存在的缺点。我们对培养基的成分进行了调整,将普通庖肉培养基换成以蛋白胨酵母粉为主要成分的改良型培养基,并且对制备方法在脱毒、盐析和脱盐等步骤上进行了改进,在此基础之上,就细菌的增殖能力、类毒素效价、类毒素的纯度和产量、免疫原性等指标进行了全面比较,得到以下主要结果:1.比浊法检测细菌生长曲线和破伤风类毒素效价检测实验发现,改良型培养基能够明显提高细菌的增殖能力(P=0.033)和类毒素效价(P=0.032),并且通过两种工艺生产的类毒素毒力无明显差别(P=0.792)。2.BCA蛋白浓度检测结果发现,改良制备方法提取的精制破伤风类毒素总蛋白浓度高于常规制备方法,但两者无显著性差异(P=0.605);聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western Blot结果表明,改良的制备方法能够明显提高破伤风类毒素的纯度(P=0.001)和产量(P=0.001)。3.动物急性特异性毒性和动物长期特异性毒性研究发现,通过改良工艺制备的疫苗没有外源性毒性物质,能明显提高动物的存活率(P=0.027)并维持体重稳定(P=0.016);免疫原性评价结果发现,与常规方法提取的类毒素疫苗相比,改良方法提取的破伤风类毒素疫苗具有更高的免疫原性(P=0.001)。综上,与常规培养基和制备方法相比,我们改良的培养基和制备方法能够明显提高破伤风类毒素疫苗的纯化程度和免疫原性,降低疫苗的外源性毒性物质和副作用,并且可适应规模化生产破伤风精制类毒素的工艺条件,对于国内企业生产破伤风类毒素疫苗具有指导和借鉴意义。
【学位单位】：云南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R392
【部分图文】：